面神經損傷修復機制研究.pdf

1、第一部分 面神經斷傷吻合后面部運動功能恢復的實驗研究 目的觀察大鼠面神經損傷修復后的行為學、功能學恢復過程，為面神經損傷修復研究提供客觀的實驗性功能評估手段。方法大鼠面神經斷傷吻合建立外傷性面癱模型，術后每周觀察觸須拂動、角膜吹氣誘發(fā)的瞬目動作等面部運動，記錄健患兩側面神經電圖(ENoG)與瞬目反射(BR)的變化。結果術后患側觸須拂動與瞬目動作消失，但立即出現觸須細微的顫抖，術后1月左右面部運動開始恢復，2月時可出現耳周

2、肌肉的聯帶運動。ENoG檢測發(fā)現，傷后患側復合肌肉動作電位(CAMP)仍可引出，術后21天時潛伏期開始延長，1月時達高峰并開始恢復，3-4月后基本穩(wěn)定但仍不能恢復至健側正常水平，其中21-63天時延長的潛伏期值與其它各時間點相比差異有顯著性(P＜0.05)。患側CAMP的振幅與刺激強度變化無明顯規(guī)律性，潛伏期、振幅與刺激強度三值間也無相關性。BR檢測發(fā)現，患側R1波在術后7、14天時消失，1月后恢復檢出，術后2月左右同側口輪匝肌處可以記

3、錄到提示聯帶運動的R1樣肌電反射波(R1oris)，R1oris與同時記錄的R1潛伏期值呈一致性下降趨勢，2月時的R1oris潛伏期值與此后各時點值間的差異有顯著性。結論神經電圖和瞬目反射的檢測方法有助于反映面癱模型大鼠的面部行為學恢復過程，但仍有待于進一步研究完善。 第二部分 損傷修復過程中面運動神經元定位分布變化研究 目的觀察面神經斷傷吻合后再生修復過程中，面運動神經元的定位分布與再生達靶支配變化，探討其在聯

4、帶等面癱后遺癥發(fā)生中的可能作用。方法建立大鼠面神經斷傷吻合模型，采用尼氏染色與神經逆行熒光示蹤技術，觀察術后60、90與120天時健患兩側面運動神經元的定位分布與再生支配變化。結果(1)傷后健側尼氏染色與熒光金(FG)逆行示蹤標記的面運動神經元分布特征與數量無變化。而患側代表成功再生達靶的FG標記神經元數目較尼氏染色標記的神經元數目明顯減少(P＜0.05)，術后60、90與120天時FG標記的神經元數目變化不明顯。健患兩側尼氏染色神經元

5、的數量及分布特征基本一致，僅有神經元分布區(qū)域的輕微縮小趨勢，未發(fā)現傷后神經元有壞死與調亡表現。(2)FG與熒光紅(FR)神經逆行雙標發(fā)現，面神經的顳支主要由背側亞核區(qū)運動神經元支配，以背內、外側亞核為主；頰支則主要由各中間亞核、外側亞核及少部分背外側亞核支配，健患兩側頰支支配區(qū)內均可見支配顳支的錯位神經元存在，其分別占同側示蹤神經元總數的比例之間差異無顯著性(P＞0.05)，提示雜亂再生的熒光雙標記神經元僅出現于患側。結論面神經損傷修復

6、晚期，可能存在再生達靶不成功但仍處于存活狀態(tài)的運動神經元，這類的神經元結構與功能意義值得深入研究。在面神經損傷修復與后遺癥產生機制中，除有軸索過度芽生與錯靶支配可能外，面神經核高興奮性、假突觸傳遞等的作用也有待研究證實。 第三部分 損傷修復過程中面運動神經元興奮性調控的塑形改變 目的觀察面神經損傷修復過程中，面運動神經元突觸傳入與神經遞質受體的塑形改變，探討其在傷后面神經核運動信息調控中的可能作用。方法建立大鼠面

7、神經斷傷吻合模型，術后0、7、21、60天時，分別用免疫組織化學與RT-PCR技術，觀察面神經核內突觸體素(p38)、谷氨酸神經遞質受體亞單位(NMDAR2A與GluR2)的表達變化，同時用透射電鏡技術觀察術后90天時面運動神經元的超微結構改變與突觸數量變化。結果面神經核內代表突觸活性與數量的p38表達于面運動神經元胞體與樹突結構上，傷后患側的免疫反應強度明顯減弱(p＜0.05)，7天時最低，21天后有輕微升高。面神經核區(qū)腦組織內可檢測

8、出NMDAR2A與GluR2的mRNA表達，兩者表現出不同的表達強度變化，前者在傷側的表達水平顯著降低(p＜0.05)，而后者無顯著性變化(p＞0.05)。超微結構觀察發(fā)現面運動神經元無壞死與凋亡樣結構改變，但其突觸結構的數量減少。結論面神經損傷修復過程中，面運動神經元的突觸傳入末梢出現相應塑形改變，谷氨酸神經遞質受體組成也呈現不同的表達改變，從而適應傷后面運動神經元興奮性的改變，并可能直接影響面神經功能恢復并導致面癱等后遺癥的發(fā)生。

9、 第四部分 面神經損傷修復過程中星形膠質細胞塑形活動研究 目的觀察面神經損傷修復過程中面運動神經元周圍星形膠質細胞塑形活動。方法大鼠面神經斷傷吻合后0、7、21、60天時，觀察面部運動恢復變化同時，分別用免疫組織化學、神經逆行示蹤結合免疫熒光組織化學的雙重標記技術以及透射電鏡技術，觀察外周損傷后面神經核內膠質原纖維酸性蛋白(GFAP)、連接蛋白(Cx43與Cx32)表達以及星形膠質細胞的超微結構變化。結果面神經損傷

10、修復過程中面部運動功能逐漸恢復，但難以完全恢復正常，且常伴有面癱后遺癥聯帶。熒光金(FG)逆行示蹤標記的面運動神經元具有明顯的亞區(qū)分布特征。正常狀態(tài)下面神經核區(qū)GFAP表達強度極弱，術后7天時患側表達強度顯著增強，至再生修復晚期減弱，但仍高于健側水平。Cx43表達于星形膠質細胞與神經元，而Cx32則主要表達于神經元內。面神經損傷后，患側Cx43/32的表達強度均較健側增高，以Cx43為明顯，21天后表達強度開始降低。超微結構觀察表明，術