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1、目的:研究阿托伐他?。ˋTO)對(duì)在無(wú)血清和缺氧條件下對(duì)比劑(CM)誘導(dǎo)人腎小管上皮細(xì)胞凋亡的影響,以及氧化應(yīng)激在該過(guò)程中的可能作用機(jī)制。
方法:以人腎小管上皮細(xì)胞(HKC)為研究對(duì)象,進(jìn)行培養(yǎng),在無(wú)血清、缺氧條件下,分別與不同濃度(100、120、150、200mgI/mL)碘海醇孵育12h;碘海醇(120mgI/mL)分別處理細(xì)胞2、6、9、12h;不同濃度ATO(10-11、10-10、10-9、10-8、10-7、10-
2、6、10-5mol/L)先與細(xì)胞孵育24h,同一濃度ATO(10-7mol/L)先處理細(xì)胞6、12、24、36、48h,二者分別再與碘海醇(120mgI/mL)在無(wú)血清、缺氧條件下共刺激12h;不同濃度ATO(10-10、10-9、10-8、10-7mol/L)與細(xì)胞共孵育24h后,再與碘海醇(120mgI/mL)在無(wú)血清、缺氧條件下共刺激12h。采用CCK-8法檢測(cè)細(xì)胞增殖能力;TUNEL法觀察細(xì)胞凋亡情況;采用化學(xué)法檢測(cè)丙二醛(MD
3、A)含量和超氧化物歧化酶(SOD)活性;Western blo t檢測(cè)gp91phox、P22phox、bax及bcl-2等蛋白表達(dá)。
結(jié)果:CCK-8法示與正常組(6.06±0.18)%相比,各組細(xì)胞增殖能力均受不同程度抑制,其中CM+缺氧組受影響最明顯[(57.86±0.28)%,P<0.05],ATO處理后有所改善,且與濃度有關(guān)。TUNEL檢測(cè)顯示與正常組(0.06±0.01)相比,CM+缺氧組細(xì)胞凋亡情況最明顯(0.8
4、8±0.03, P<0.05),而ATO可改善凋亡情況。檢測(cè)MDA含量與SOD活性顯示,CM使MDA含量增加及SOD活性降低,而ATO可使MDA含量減少及SOD活性升高(P<0.05)。Western blot法檢測(cè)顯示,CM使gp91phox、p22phox、bax表達(dá)上調(diào),bcl-2表達(dá)下調(diào),而ATO使gp91phox、p22phox、bax表達(dá)下調(diào),而bcl-2表達(dá)上調(diào)(P<0.05)。
結(jié)論:在無(wú)血清缺氧條件下,碘海醇
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