碘對(duì)比劑致人腎小管上皮細(xì)胞毒性及阿托伐他汀保護(hù)作用.pdf

1、目的：
　　1.以體外培養(yǎng)的人近端腎小管上皮細(xì)胞（HK-2）為模型，比較等滲和低滲碘對(duì)比劑的細(xì)胞毒性作用。
　　2.探討NADPH氧化酶在碘對(duì)比劑致HK-2細(xì)胞毒性中的作用。
　　3.探討阿托伐他汀對(duì)碘對(duì)比劑致HK-2細(xì)胞毒性的保護(hù)作用及可能機(jī)制。
　　方法：
　　1.分別予200mg I/ml、100 mg I/ml、50mg I/ml碘克沙醇(IOCM)和碘海醇(LOCM)干預(yù)HK-2細(xì)胞1h、3h、6

2、h、12h。采用MTT法檢測(cè)細(xì)胞活力;收集細(xì)胞培養(yǎng)上清液測(cè)定LDH水平檢測(cè)細(xì)胞損傷。
　　2.應(yīng)用碘海醇(200mg I/ml)干預(yù)HK-2細(xì)胞6h建立細(xì)胞損傷模型，研究NADPH氧化酶抑制劑-Apocynin對(duì)其保護(hù)作用。采用MTT法檢測(cè)細(xì)胞活力;采用RT-PCR方法檢測(cè)細(xì)胞內(nèi)NOX4和p22phoxmRNA表達(dá)。
　　3.分別予1μmol/l、20μmol/l、40μmol/l阿托伐他汀預(yù)處理HK-2細(xì)胞2h，同上建立細(xì)

3、胞損傷模型，采用MTT法檢測(cè)細(xì)胞活力;細(xì)胞損傷模型組予40μmol/l阿托伐他汀預(yù)處理2h，采用RT-PCR方法檢測(cè)細(xì)胞內(nèi)NOX4、p22phoxmRNA表達(dá)水平;流式細(xì)胞儀測(cè)定凋亡細(xì)胞比例;透射電鏡觀察細(xì)胞形態(tài)學(xué)變化。
　　結(jié)果：
　　1.與對(duì)照組相比，等滲、低滲碘對(duì)比劑干預(yù)組HK-2細(xì)胞活力均明顯降低，LDH水平明顯增高(P＜0.05，P＜0.05);隨著碘濃度的增加、作用時(shí)間的延長(zhǎng)，碘對(duì)比劑對(duì)HK-2細(xì)胞的毒性增加(P

4、＜0.05，P＜0.05);相同碘濃度和作用時(shí)間下，等滲對(duì)比劑對(duì)HK-2細(xì)胞的毒性低于低滲對(duì)比劑(P＜0.05)。
　　2.與對(duì)照組相比，碘海醇(200mg I/ml)干預(yù)HK-2細(xì)胞6h后，細(xì)胞活力明顯降低(P＜0.05)，NOX4、p22phoxmRNA表達(dá)水平明顯增高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05); Apocynin組細(xì)胞活力高于模型組(P＜0.05)，NOX4、p22phoxmRNA表達(dá)水平較模型組下調(diào)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意

5、義(P＜0.05)。
　　3.HK-2細(xì)胞損傷模型經(jīng)不同濃度阿托伐他汀預(yù)處理后，細(xì)胞活力增強(qiáng)(P＜0.05)，并呈劑量依賴性。予40μmol/l阿托伐他汀預(yù)處理2h后，細(xì)胞損傷模型組細(xì)胞內(nèi)NOX4、p22phoxmRNA表達(dá)水平明顯降低(P＜0.05);凋亡細(xì)胞比例顯著減少(P＜0.05);透射電鏡下細(xì)胞損傷程度減輕。
　　結(jié)論：
　　1.在本實(shí)驗(yàn)研究范圍內(nèi)，等滲和低滲碘對(duì)比劑對(duì)HK-2細(xì)胞均有明顯的毒性作用，且呈劑量