含碘造影劑致人腎小管上皮細(xì)胞的損傷作用及?；撬岣深A(yù)研究.pdf

1、第一部分：
　　 目的:以體外培養(yǎng)的人近端腎小管上皮細(xì)胞(HK—2)為模型，比較高滲、低滲、等滲含碘造影劑泛影葡胺、碘海醇和碘克沙醇的細(xì)胞毒作用。并進(jìn)一步探討低滲造影劑碘海醇致細(xì)胞凋亡、氧化應(yīng)激的特點(diǎn)和滲透壓在細(xì)胞損傷中的作用。
　　 方法:1.體外培養(yǎng)的HK—2細(xì)胞分為培養(yǎng)基對(duì)照組和造影劑刺激組—泛影葡胺組，碘海醇組，碘克沙醇組。用細(xì)胞增殖/毒性試劑盒(CCK—8)分別觀察各組同一濃度(100mg I/ml)不同作用時(shí)

2、間(2h，4h，6h)和同一作用時(shí)間(6h)不同濃度(25，50，100，125mg I/ml)的細(xì)胞活力。2.HK—2細(xì)胞分為培養(yǎng)基對(duì)照組，碘海醇刺激組。用Hoechst33342染色在熒光顯微鏡下觀察細(xì)胞凋亡形態(tài)，流式AnnexinV—FITC/PI雙染和半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶(caspase—3)活性比色法觀察上述時(shí)間梯度和濃度梯度下細(xì)胞凋亡變化。3.HK—2細(xì)胞分為培養(yǎng)基對(duì)照組，碘海醇刺激組(100mg I/ml，6h)，甘露醇

3、等滲對(duì)照組。CCK—8法觀察細(xì)胞活力，流式Annexin V—FITC/PI雙染和caspase—3活性比色法觀察細(xì)胞凋亡，流式DCFH—DA細(xì)胞內(nèi)標(biāo)記法比較活性氧(ROS)變化。
　　 結(jié)果:1.高滲造影劑泛影葡胺和低滲造影劑碘海醇致HK—2細(xì)胞活力呈時(shí)間依賴和碘劑量依賴性下降(P＜0.01)，等滲造影劑碘克沙醇于本研究范圍內(nèi)未見(jiàn)細(xì)胞毒作用。2.碘海醇刺激組與培養(yǎng)基對(duì)照組比，Hoechst33342染色見(jiàn)細(xì)胞核濃聚，凋亡小體生

4、成；流式雙染凋亡率和caspase—3活性呈時(shí)間(P＜0.01)和碘劑量依賴性升高(P＜0.05)。3.碘海醇(100 mg I/ml、6h)組ROS較培養(yǎng)基對(duì)照組升高(P＜0.01)。4.甘露醇等滲對(duì)照組的細(xì)胞活力較培養(yǎng)基對(duì)照組無(wú)明顯下降(P＞0.05)、流式雙染凋亡率(P＜0.05)、caspase—3活性(P＜0.05)和ROS升高(P＜0.01)，均低于碘海醇刺激組(P＜0.05)。
　　 結(jié)論:在HK—2細(xì)胞的細(xì)胞毒損

5、傷中，等滲造影劑碘克沙醇作用最輕、高滲造影劑泛影葡胺細(xì)胞毒力最大、低滲造影劑碘海醇居中，且后兩者呈時(shí)間及碘劑量依賴性變化。碘海醇呈時(shí)間及碘劑量依賴性導(dǎo)致HK—2細(xì)胞凋亡率增加。氧化應(yīng)激參與了細(xì)胞損傷。滲透壓不能完全解釋碘海醇導(dǎo)致HK—2細(xì)胞的直接損傷作用。
　　 第二部分：
　　 目的:1:本研究擬探討?；撬釋?duì)碘海醇致HK—2細(xì)胞損傷的保護(hù)作用及部分機(jī)制。
　　 方法:將體外培養(yǎng)的HK—2細(xì)胞分為①培養(yǎng)基對(duì)照組，

6、②?；撬?3，12，24mmol/L)+培養(yǎng)基組，③碘海醇刺激組(100mg I/ml、6h)，④?；撬?3，12，24mmol/L)+碘海醇(100mg I/ml、6h)共作用組。1.用細(xì)胞增殖/毒性試劑盒(CCK—8)測(cè)定細(xì)胞活力；流式Annexin V—FITC/PI雙染和半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶(caspase—3)活性比色法觀察細(xì)胞凋亡。2.流式DCFH—DA細(xì)胞內(nèi)標(biāo)記法測(cè)定細(xì)胞活性氧(ROS)。3.選取?；撬?24mmol/L

7、)+碘海醇(100mg I/ml、6小時(shí))作為干預(yù)組，用Westen blot檢測(cè)細(xì)胞Bcl—2、Bax的表達(dá)。
　　 結(jié)果:1.?；撬峒尤肱囵B(yǎng)基組對(duì)細(xì)胞活力、凋亡率、caspase—3活性、ROS及Bcl—2、Bax表達(dá)無(wú)影響(P＞0.05)。2.牛磺酸呈劑量依賴性增加細(xì)胞活力，減輕凋亡。牛磺酸(3，12，24mmol/L)干預(yù)后和碘海醇刺激組比，細(xì)胞活力分別為(88.00±1.00)％，(91.33±0.58)％，(95.6

8、7±1.52)％比(76.67±1.53)％(P＜0.05)。流式Annexin V—FITC/PI雙染法示細(xì)胞凋亡率分別為(8.84±1.75)％，(7.86±1.82)％，(6.30±1.50)％比(11.98±0.39)％(P＜0.01)。caspase—3的活性以培養(yǎng)基對(duì)照組的倍數(shù)表示，分別為(1.33±0.10)倍，(1.27±0.0)倍和(1.10±0.04)倍比(1.42±0.1)倍(P＜0.05)。3.?；撬峥蓽p輕碘海醇

9、刺激HK—2細(xì)胞產(chǎn)生的ROS升高，但于本研究濃度范圍內(nèi)無(wú)劑量依賴性。以培養(yǎng)基對(duì)照組的倍數(shù)表示，?；撬?3，12，24mmol/L)干預(yù)組和碘海醇刺激組的ROS分別為(1.12±0.12)倍，(1.11±0.15)倍，(1.12±0.10)倍比(1.29±0.09)倍(P＜0.05)。4.?；撬峥缮险{(diào)Bcl—2表達(dá)(P＜0.05)，Bax表達(dá)各組無(wú)變化(P＞0.05)。
　　 結(jié)論:在一定濃度范圍內(nèi)，?；撬崮艹蕜┝恳蕾囆员Ｗo(hù)體外培