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文檔簡介
1、為了更好地在基因和細胞水平完善血小板無力癥患者基因診斷,我們構(gòu)建了基因診斷用正常pcDNA3.1(+)/GP Ⅱb和pcDNA3.1(+)/GPⅢa體外表達質(zhì)粒以及正常GPⅡb和GPⅢa熒光融合蛋白表達質(zhì)粒,利用測序、生物信息學(xué)分析以及體外表達等多種方法確認(rèn)了GPⅡb和GPⅢa cDNA序列的正確性,以此為基礎(chǔ)不僅可以保證基因治療載體的序列正確,還可以利用重疊延伸法等方法構(gòu)建血小板無力癥患者致病突變表達質(zhì)粒,建立突變體外表達細胞株,為血
2、小板無力癥確診提供重要依據(jù),進一步在細胞和亞細胞的水平上對血小板無力癥以及GPⅡb/Ⅲa復(fù)合物缺陷的病理生理機制作出研究,評估血小板無力癥基因治療的風(fēng)險性利弊.為了完善基因治療體系的安全性和可控性,我們對血小板無力癥基因治療載體體系進行了改良,構(gòu)建了GPⅡb特異啟動子人類血小板膜GPⅡb/人源基因治療載體、GPⅢa/人源基因治療載體和人血小板膜GPⅡb/Ⅲa/核糖體基因區(qū)靶向基因治療載體(pHrneo),以期望獲得目的蛋白的高組織特異性
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