復(fù)合酶制劑對(duì)烏鱧生長(zhǎng)性能及物質(zhì)代謝的影響.pdf

1、針對(duì)烏鱧對(duì)膨化飼料消化和利用能力弱的問題，本研究探討了淀粉酶、酸性蛋白酶以及中性蛋白酶復(fù)合而成的酶制劑(MEC)對(duì)烏鱧生長(zhǎng)性能、消化酶活性及相關(guān)基因表達(dá)、消化系統(tǒng)組織學(xué)形態(tài)、肝胰臟及背肌成分、糖代謝、血清生化指標(biāo)和物質(zhì)代謝的影響，并從基因表達(dá)及物質(zhì)代謝等方面探討MEC的作用機(jī)制，為烏鱧的實(shí)際生產(chǎn)更好地應(yīng)用膨化料提供理論依據(jù)。
　　選取600尾烏鱧（69.85±3.00g），隨機(jī)分為4組，每組5個(gè)網(wǎng)箱(100cm×100cm×180

2、cm)，每個(gè)網(wǎng)箱30尾魚。對(duì)照組飼喂基礎(chǔ)曰糧，試驗(yàn)1組飼喂E1組日糧（基礎(chǔ)日糧+400U/kg淀粉酶+150U/kg酸性蛋白酶+1900U/kg中性蛋白酶），試驗(yàn)2組飼喂E2組日糧（基礎(chǔ)日糧+800U/kg淀粉酶+300U/kg酸性蛋白酶+3800U/kg中性蛋白酶），試驗(yàn)3組飼喂E3組日糧（基礎(chǔ)日糧+1200U/kg淀粉酶+450U/kg酸性蛋白酶+5700U/kg中性蛋白酶）。每天飼喂兩次（6:00和15:00），試驗(yàn)預(yù)飼期7d，正

3、式期為60d。
　　(1)體外消化試驗(yàn)得出淀粉酶、酸性蛋白酶以及中性蛋白酶的最佳配伍組合為800U/kg淀粉酶+300U/kg酸性蛋白酶+3800U/kg中性蛋白酶。
　　(2)MEC顯著提高了E2與E3組烏鱧的末體重、增重率和特定生長(zhǎng)率(P＜0.05);對(duì)攝食率、餌料系數(shù)和形體指數(shù)沒有顯著影響（P＞0.05）。
　　(3)MEC顯著提高了烏鱧淀粉酶、胃蛋白酶原和胰蛋白酶原的基因表達(dá)(P＜0.05)。與對(duì)照組相比，E2

4、與E3的肝胰臟及胃的淀粉酶酶活都有顯著提高（P＜0.05），各試驗(yàn)組腸道淀粉酶活性也顯著提高（P＜0.05）;E2與E3的肝胰臟胰蛋白酶活性有顯著地升高（P＜0.05），各試驗(yàn)組的腸道內(nèi)胰蛋白酶活性也有明顯的升高（P＜0.05）。肝胰臟糜蛋白酶活性隨MEC的添加呈上升趨勢(shì)，E3較對(duì)照組則明顯升高（P＜0.05）;E2與E3腸道內(nèi)蔗糖酶活性有明顯升高（P＜0.05）。
　　(4)消化道組織切片顯示:MEC使烏鱧的胃絨毛排列更加致密且

5、明顯地改善了微絨毛形態(tài)。E2組盲囊的絨毛高度顯著升高(P＜0.05)，E3的絨毛高度要顯著低于其他三組(P＜0.05)。E1和E2前腸絨毛排列更加緊密，絨毛高度也要高于對(duì)照組（P＜0.05），E3的絨毛高度要顯著低于對(duì)照組(P＜0.05);掃描電鏡觀察發(fā)現(xiàn)對(duì)照組微絨毛受到損傷，排列極不整齊，E1和E2微絨毛排列則整齊、密集，而E3組微絨毛排列不規(guī)則、成簇排列，進(jìn)一步利用透射電鏡觀察發(fā)現(xiàn)結(jié)果與掃描電鏡結(jié)果基本對(duì)應(yīng)。后腸E3組的絨毛出現(xiàn)黏連

6、現(xiàn)象且絨毛高度顯著低于其他三組（P＜0.05），但微絨毛形態(tài)均很完好。
　　(5)MEC的添加未對(duì)烏鱧的肝胰臟造成損傷。與對(duì)照組相比，E1，E2和E3的肝糖原含量分別增加了40.00％(P＜0.05)，41.39％（P＜0.05）和25.83％（P＞0.05），脂肪含量分別增加了5.86％（P＞0.05），23.58％（P＜0.05）和18.97％(P＜0.05)。E1，E2和E3的背肌粗脂肪含量分別提高了20.39％(P＜0.0

7、5)，34.21％（P＜0.05）和27.63％(P＜0.05)。
　　(6)在糖酵解途徑中，E2與E3的己糖激酶（HK）活性有顯著提高（P＜0.05），試驗(yàn)組磷酸果糖激酶(PFK)的活性有升高趨勢(shì)（P＞0.05）;在糖異生途徑中，丙酮酸羧化酶(PC)和磷酸烯醇式丙酮酸羧激酶(PEPCK)的活性差異不顯著（P＞0.05），E1的果糖-1，6-二磷酸酶(FBP)活性顯著升高(P＜0.05)，E1以及E2的葡萄糖-6-磷酸酶(G6P)

8、活性顯著升高(P＜0.05);磷酸戊糖途徑的關(guān)鍵酶葡萄糖-6-磷酸脫氫酶(G6PDH)活性無顯著變化，但有升高趨勢(shì)（P＞0.05）;糖原合成途徑的關(guān)鍵酶糖原合酶(GCS)的活性均顯著高于對(duì)照組(P＜0.05)。對(duì)上述四種活性顯著升高的酶的相關(guān)基因表達(dá)發(fā)現(xiàn)，四種基因的表達(dá)量均有不同程度的上調(diào)，其中E2的HK及FBP基因表達(dá)水平顯著上調(diào)(P＜0.05)，E1以及E2的G6P和GCS基因表達(dá)水平顯著上調(diào)(P＜0.05)。
　　(7)血清

9、生化指標(biāo)顯示:烏鱧的血糖跟胰高血糖素含量有下降趨勢(shì)(P＞0.05)，胰島素含量有上升趨勢(shì)（P＞0.05）;E1組血氨含量顯著降低（P＜0.05），E2組甘油三酯含量顯著升高（P＜0.05），總蛋白、白蛋白、尿素氮、谷丙轉(zhuǎn)氨酶、谷草轉(zhuǎn)氨酶、膽固醇、高密度脂蛋白膽固醇及低密度脂蛋白膽固醇均無顯著變化（P＞0.05）。
　　(8)代謝組學(xué)分析:PCA分圖可以看出，各組在不同時(shí)間點(diǎn)可良好地各自聚類，說明添加MEC對(duì)烏鱧血清代謝產(chǎn)物產(chǎn)生了一

10、定影響。通過OPLS-DA等篩選出主要差異性代謝物，試驗(yàn)組E1，E2以及E3分別富集到了15，17和14種差異代謝物，其中共同差異代謝物有7種，其中二硫赤蘚糖醇、脯氨酸、甘氨酸、?；撬岷湍蛩幔蛩兀┑扔胁煌潭壬险{(diào)，4-對(duì)羥基苯乙酸以及山梨糖則是下調(diào)。其它還包括正亮氨酸、N-甲基-L-谷氨酸、3-羥基-L-脯氨酸、天冬氨酸、D-丙氨酰-D-丙氨酸和L-高絲氨酸等6種氨基酸及氨基酸衍生物，檸檬酸、派可磷酸、龍膽二糖等物質(zhì)。主要涉及精氨酸和