生姜改善非酒精性脂肪肝和胰島素抵抗的機制.pdf

1、非酒精性脂肪肝是最常見的慢性肝病，其特點是肝臟內(nèi)脂質(zhì)的異常積累。在生理條件下，肝臟可以保持低濃度的甘油三酯歸因于血漿中吸收的游離脂肪酸和脂質(zhì)從頭合成的以及脂肪酸β氧化和甘油三酯脂蛋白的分泌的平衡。在非酒精性脂肪肝患者，胰島素抵抗通過多重機制導(dǎo)致肝臟脂質(zhì)變性。造成血漿中游離脂肪酸的高吸收率是由于釋放了大量的反應(yīng)性降低的胰島素所致。高胰島素血癥促進脂肪的從頭合成，并且促進肝臟脂質(zhì)合成基因上調(diào)。增加的肝臟脂質(zhì)堆積不能通過脂肪酸β氧化來消耗從而

2、發(fā)生脂肪肝。
　　胰島素抵抗貫穿于現(xiàn)代許多慢性疾病，像肥胖，心血管疾病，最顯著的是二型糖尿病。脂肪組織胰島素抵抗胰島素抵抗系統(tǒng)中的一個主要組成部分，尤其在肥胖引起的相關(guān)的胰島素抵抗。人們認(rèn)識到脂肪組織的分泌在體內(nèi)平衡中起到重要作用。脂肪組織在脂毒性的發(fā)展中扮演著關(guān)鍵的角色，脂肪組織胰島素抵抗導(dǎo)致過量的游離脂肪酸從脂肪組織釋放出來。因此改善脂質(zhì)代謝紊亂對其他代謝紊亂的治療也有作用。脂肪組織的機制效應(yīng)主要是通過旁分泌和內(nèi)分泌來實現(xiàn)。脂

3、肪組織在大多數(shù)人群中治療代謝性疾病的一個關(guān)鍵調(diào)節(jié)因子，游離脂肪酸的代謝和炎癥因子的分泌在導(dǎo)致非酒精性脂肪肝疾病也起到重要作用。
　　生姜，是一種在世界上被廣泛用于調(diào)味料和醫(yī)藥的植物，已經(jīng)發(fā)現(xiàn)它有多重藥效，像抗炎，抗氧化，改善心血管的活性等作用。生姜已經(jīng)被證明可以改善脂質(zhì)代謝紊亂。然而其降低甘油三酯的機制還不是很清楚。在動物和人群中高果糖飲食可以導(dǎo)致脂肪肝血脂異常，胰島素抵抗和肥胖。肝臟是代謝的主要器官，脂肪肝（過量的甘油三酯在肝細(xì)

4、胞中堆積）是非酒精性脂肪肝疾病的標(biāo)志，已經(jīng)成為高流行并且被廣泛關(guān)注的健康問題，脂肪肝可以導(dǎo)致嚴(yán)重的肝疾病，并且和心血管功能失調(diào)有關(guān)。高甘油三酯血癥是一種常見的脂質(zhì)代謝紊亂，是心血管疾病發(fā)生的一個獨立因素。自古以來，人們發(fā)現(xiàn)生姜可以治療各種各樣的不相關(guān)的疾病，包括關(guān)節(jié)炎，風(fēng)濕，扭傷，肌肉酸痛，疼痛，喉嚨痛，抽筋，便秘，消化不良，嘔吐，高血壓，老年癡呆癥，發(fā)燒，感染性疾病和蠕蟲病。目前，人們正在研究其活性成分以及其藥理作用，主要包括免疫調(diào)節(jié)

5、，抗致瘤性，抗炎，抗凋亡，抗高血糖和抗嘔吐等。生姜是一種很強的抗氧化物質(zhì)，可以減輕或防止自由基的生成。它被認(rèn)為是一種安全的中草藥并且副作用較小。
　　本實驗分兩部分:1.生姜改善果糖所致大鼠脂肪肝和高甘油三酯血癥的作用機制。2.生姜改善果糖所致大鼠脂肪組織胰島素抵抗的機制
　　一、生姜改善果糖所致大鼠脂肪肝和高甘油三酯血癥的作用機制
　　目的:研究生姜通過CHREBP通路改善果糖致脂肪肝和高甘油三酯血癥的作用機制。

6、r>　　方法:
　　1.SD雄性大鼠24只，體重為210-230g，分為:
　　對照組(CON):標(biāo)準(zhǔn)飼料+自由飲水果糖組(FRU):標(biāo)準(zhǔn)飼料+10％果糖水生姜低劑量組(FGL):標(biāo)準(zhǔn)飼料+果糖水+ginger(生姜20mg/kg)生姜高劑量(FGH):標(biāo)準(zhǔn)飼料+果糖水+ginger(生姜50mg/kg)每天稱大鼠進食量和果糖水量，按照FRU組進食果糖量調(diào)節(jié)FGL，F(xiàn)GH組果糖水的濃度，使各組進食果糖量無差異。
　　2

7、.第35天給CON組清水，其余三組給果糖水，全部禁食14h后經(jīng)眼眶取血，檢測血漿中TG，TC，GLU，Insulin，NEFA濃度。然后處死大鼠，分別取肝臟并稱重，附睪周圍脂肪，腎臟周圍脂肪等器官和組織進行生化，基因和蛋白檢測。
　　3.肝臟內(nèi)TG含量的檢測以及肝臟組織病理學(xué)的檢測。
　　4.Real-time PCR檢測肝臟中CHREB，PPPAR，CPT1，ACO，ACC，SREBP，SCD1等基因的表達以及WB檢測核蛋

8、白CHREBP的表達。
　　結(jié)果:
　　1.進食果糖水狀態(tài)下，血漿中TG，TC，GLU，Insulin的濃度都增加，NEFA的濃度無變化。
　　2.果糖喂養(yǎng)沒有改變肝臟的重量，但是肝臟重量/體重是增加的，肝臟內(nèi)TG的含量升高。
　　3.生姜（50mg/kg）治療后沒有改變食物的攝入量，體重，血漿中 TC濃度以及肝臟重量。但是血漿中TG，GLU，NEFA的濃度以及肝臟內(nèi)TG的濃度都降低。血漿中胰島素的濃度也有下降的

9、趨勢。病理顯示，肝臟空泡化以及油紅染色面積都減小。
　　4.RT-PCR顯示果糖喂養(yǎng)沒有改變PPAR-γ的含量，但是SREBP1c，ChREBP，ACC，F(xiàn)AS，SCD1，G6Pase的含量都增加，WB顯示，ChREBP核蛋白的含量也是增加的。生姜治療后ChREBP，ACC，F(xiàn)AS，SCD1，G6Pase的含量都下降，但是SREBP1c沒有變化。核蛋白ChREBP也下調(diào)。
　　結(jié)論:生姜對果糖導(dǎo)致的糖脂代謝紊亂有明顯的改善的

10、作用，CHREBP是其改善通路之一。
　　二、生姜改善果糖誘導(dǎo)的大鼠脂肪組織胰島素抵抗和脂肪巨噬細(xì)胞相關(guān)的炎癥因子的關(guān)系
　　方法:
　　1.SD雄性大鼠24只，體重為210-230g，分為:對照組(CON):標(biāo)準(zhǔn)飼料+自由飲水果糖組(FRU):標(biāo)準(zhǔn)飼料+10％果糖水生姜低劑量組(FGL):標(biāo)準(zhǔn)飼料+果糖水+ginger(生姜20mg/kg)生姜高劑量(FGH):標(biāo)準(zhǔn)飼料+果糖水+ginger（生姜50mg/kg），每

11、天稱大鼠進食量和果糖水量，按照FRU組進食果糖量調(diào)節(jié)FGL，F(xiàn)GH組果糖水的濃度，使各組進食果糖量無差異。
　　2.第四周末行OGTT，禁食14h小時后給葡萄糖水（2 g/kg），分別在20min，60min，120min后經(jīng)眼眶取血，用來檢測血漿中GLU，Insulin，NEFA的濃度。
　　3.35天后處死大鼠取附睪周圍白色脂肪用來檢測基因表達。
　　4.Real-Time PCR檢測CD68, F4/80, TN

12、F, IL-6, IRS-1, IRS-2,MCP-1，CCR2，ChREBP，ACC，F(xiàn)AS，SCD1等基因。
　　結(jié)果:
　　1.五周喂養(yǎng)果糖水減少食物的攝入量。和CON組相比，果糖水的攝入沒有改變大鼠的體重。eWAT的重量，脂肪細(xì)胞的體積有增加的趨勢，脂肪細(xì)胞的數(shù)量有減少的趨勢。FRU組基礎(chǔ)血漿中NEFA的濃度以及脂肪組織胰島素抵抗指數(shù)增加明顯。OGTT中的血漿中NEFA濃度也增加。
　　2.生姜治療后沒有改變食

13、物的攝入量，體重，以及體重增加量。生姜治療后eWAT，eWAT/體重，脂肪細(xì)胞的大小都有下降的趨勢，并且脂肪細(xì)胞的數(shù)量有增加的趨勢。基礎(chǔ)血漿葡萄糖和胰島素濃度降低。OGTT中，F(xiàn)GH組的血糖濃度沒有明顯變化，但是胰島素濃度明顯降低。生姜治療后脂肪組織胰島素抵抗指數(shù)和血漿中NEFA濃度顯著降低。
　　3.生姜治療后可以顯著抑制脂肪組織中CD68，F(xiàn)4/80，TNF-α，IL-6的基因表達。并且MCP-1和CCR2的表達也被抑制。另外