αB-晶體蛋白的核輸出信號(hào)預(yù)測(cè)及定位.pdf

1、αB-crystallin(CRYAB基因的蛋白產(chǎn)物) 是最重要的晶狀體結(jié)構(gòu)組成蛋白之一，和其它晶狀體蛋白一起組成晶狀體。先天性白內(nèi)障患者中至少有三分之一明確與白內(nèi)障致病基因的突變有關(guān)，約有一半白內(nèi)障病人，是由于晶體蛋白基因突變引起的。在晶狀體中，αB-crystallin發(fā)揮重要作用，它維持著晶狀體的透明；屬于小分子熱休克蛋白超家族成員，在體內(nèi)具有分子伴侶的功能，可防止晶狀體細(xì)胞內(nèi)其它蛋白質(zhì)的聚集，從而維持這些蛋白的正常功能；該蛋白參

2、與應(yīng)激反應(yīng)，可被熱休克、輻射、缺氧以及一些藥物激活，起到抑制細(xì)胞凋亡的作用；αB的突變可能引起心臟疾病，神經(jīng)肌肉疾病。 在αB-crystallin執(zhí)行生理功能的過(guò)程中，該蛋白可以動(dòng)態(tài)地進(jìn)入和輸出細(xì)胞核。CRYAB在核轉(zhuǎn)位過(guò)程中，一方面依賴CRYAB蛋白本身所固有的核輸出信號(hào)，另一方面需要其它核轉(zhuǎn)運(yùn)受體蛋白的協(xié)同參與?；谶@一分析，我們對(duì)CRYAB進(jìn)行結(jié)構(gòu)域搜索，發(fā)現(xiàn)CRYAB的68－81位氨基酸可能具有核輸出信號(hào)序列(Necl

3、ear Exprot Signal)的特征。 本課題構(gòu)建綠色熒光蛋白(GFP)和CRYAB融合蛋白，并通過(guò)定點(diǎn)突變，產(chǎn)生各種αB-crystallin的突變型，分析野生型和突變型CRYAB在晶狀體上皮細(xì)胞HLE的亞細(xì)胞定位。通過(guò)熒光顯微鏡的觀察，發(fā)現(xiàn)野生型CRYAB主要定位于細(xì)胞質(zhì)，分布相對(duì)均勻；突變型CRYAB定位于細(xì)胞質(zhì)和細(xì)胞核，推測(cè)可能發(fā)生了轉(zhuǎn)位障礙。在核輸出抑制劑LMB作用下，CRYAB核輸出受到抑制，使得蛋白表達(dá)后聚