αB-晶體蛋白的核輸出信號預測及定位.pdf

1、αB-crystallin(CRYAB基因的蛋白產(chǎn)物) 是最重要的晶狀體結構組成蛋白之一，和其它晶狀體蛋白一起組成晶狀體。先天性白內障患者中至少有三分之一明確與白內障致病基因的突變有關，約有一半白內障病人，是由于晶體蛋白基因突變引起的。在晶狀體中，αB-crystallin發(fā)揮重要作用，它維持著晶狀體的透明；屬于小分子熱休克蛋白超家族成員，在體內具有分子伴侶的功能，可防止晶狀體細胞內其它蛋白質的聚集，從而維持這些蛋白的正常功能；該蛋白參

2、與應激反應，可被熱休克、輻射、缺氧以及一些藥物激活，起到抑制細胞凋亡的作用；αB的突變可能引起心臟疾病，神經(jīng)肌肉疾病。 在αB-crystallin執(zhí)行生理功能的過程中，該蛋白可以動態(tài)地進入和輸出細胞核。CRYAB在核轉位過程中，一方面依賴CRYAB蛋白本身所固有的核輸出信號，另一方面需要其它核轉運受體蛋白的協(xié)同參與?；谶@一分析，我們對CRYAB進行結構域搜索，發(fā)現(xiàn)CRYAB的68－81位氨基酸可能具有核輸出信號序列(Necl

3、ear Exprot Signal)的特征。 本課題構建綠色熒光蛋白(GFP)和CRYAB融合蛋白，并通過定點突變，產(chǎn)生各種αB-crystallin的突變型，分析野生型和突變型CRYAB在晶狀體上皮細胞HLE的亞細胞定位。通過熒光顯微鏡的觀察，發(fā)現(xiàn)野生型CRYAB主要定位于細胞質，分布相對均勻；突變型CRYAB定位于細胞質和細胞核，推測可能發(fā)生了轉位障礙。在核輸出抑制劑LMB作用下，CRYAB核輸出受到抑制，使得蛋白表達后聚