Mig-7在膠質(zhì)瘤血管生成擬態(tài)和侵襲性的基礎(chǔ)與臨床研究.pdf

1、膠質(zhì)母細(xì)胞瘤（glioblastoma，GMB）是神經(jīng)系統(tǒng)最常見的腫瘤，其特點(diǎn)包括復(fù)發(fā)率高、侵襲性強(qiáng)、預(yù)后差等。目前，膠質(zhì)瘤患者常采用多種聯(lián)合治療手段，如手術(shù)治療、化療、放療以及免疫治療等，效果均不是很理想。近幾年隨著對(duì)膠質(zhì)瘤發(fā)生、發(fā)展的不斷探索，證實(shí)膠質(zhì)瘤血管生成擬態(tài)的形成參與腫瘤侵襲以及患者的預(yù)后情況,血管擬態(tài)的形成一方面加深了我們對(duì)于膠質(zhì)瘤微環(huán)境的了解、豐富了我們對(duì)膠質(zhì)瘤血管的認(rèn)識(shí)；另一方面也對(duì)我們抗膠質(zhì)瘤治療提出了機(jī)遇和挑戰(zhàn)。因

2、此，抗血管生成擬態(tài)迅速成為抗膠質(zhì)瘤研究的熱點(diǎn)。
　　Mig-7（migration inducing protein7，遷移誘導(dǎo)蛋白）目前在多種腫瘤中表達(dá)，但在膠質(zhì)瘤中表達(dá)未見國(guó)內(nèi)外報(bào)道，同時(shí)Mig-7是否參與膠質(zhì)瘤侵襲和VM（vasculogenic mimicry，血管生成擬態(tài)）的形成，目前未見相關(guān)文獻(xiàn)報(bào)道。
　　目的：
　　一方面從臨床標(biāo)本資料著手，研究膠質(zhì)瘤Mig-7的表達(dá)與血管生成擬態(tài)、腫瘤分級(jí)以及膠質(zhì)瘤患者

3、的預(yù)后情況的相關(guān)性。另一方面從體外細(xì)胞水平出發(fā)，探究Mig-7參與膠質(zhì)瘤細(xì)胞系的遷移侵襲和血管生成擬態(tài)的發(fā)生與發(fā)展，旨在為膠質(zhì)瘤患者治療選擇提供良好的實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)。
　　方法：
　　1、采用免疫組化方法檢測(cè)Mig-7在不同級(jí)別膠質(zhì)瘤和對(duì)照組的表達(dá)情況，并統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。
　　2、采用CD34+和PAS雙染方法檢測(cè)VM在不同級(jí)別膠質(zhì)瘤和對(duì)照組的表達(dá)情況，并統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。
　　3、采用western-blot方法檢測(cè)Mig-7

4、不同級(jí)別膠質(zhì)瘤和對(duì)照組的蛋白表達(dá)情況，并統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。
　　4、采用RNA干擾技術(shù)，篩選出Mig-7干擾后單克隆細(xì)胞株，并采用qPCR檢測(cè)各組之間Mig-7的RNA表達(dá)情況，并統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。
　　5、采用Transwell小室方法檢測(cè)U87組、vector組和Mig-7 shRNA組遷移侵襲能力，并統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。
　　6、采用三維培養(yǎng)技術(shù)檢測(cè)U87組、vector組和Mig-7 shRNA組形成血管生成擬態(tài)的能力，并統(tǒng)計(jì)學(xué)分

5、析。
　　結(jié)果：
　　1、Mig-7免疫組化結(jié)果表明：膠質(zhì)瘤病理標(biāo)本Ⅰ+Ⅱ級(jí)20例，陽性率是20％（4/20）。膠質(zhì)瘤病理標(biāo)本Ⅲ級(jí)20例，陽性率是75%（15/20）；膠質(zhì)瘤病理標(biāo)本Ⅳ級(jí)20例，陽性率是75%（15/20）?？傮w表達(dá)陽性率56.7%。根據(jù)免疫組化評(píng)分，我們做統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，由于一級(jí)膠質(zhì)瘤數(shù)量較少，我們把一級(jí)膠質(zhì)瘤和二級(jí)膠質(zhì)瘤合并為一組，結(jié)果為：總體單因素方差分析F=10.976，P=0.000；組間比較示：Ⅰ+Ⅱ

6、級(jí)與Ⅲ級(jí)差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P=0.000）；Ⅰ+Ⅱ級(jí)與Ⅳ級(jí)的差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P=0.000）；但是Ⅲ級(jí)與Ⅳ級(jí)的差異不具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P=0.436）。
　　2、CD34+和PAS雙染結(jié)果表明：CD34、PAS雙染膠質(zhì)瘤VM，膠質(zhì)瘤標(biāo)本總陽性率為70%（42/60）Ⅰ+Ⅱ級(jí)陽性率為45%（9/20）；Ⅲ級(jí)陽性率75%（15/20）；Ⅳ級(jí)陽性率90%（18/20）；外傷腫瘤組織10例，陽性率0%（0/10）。采用單因素方差分析示

7、：F=70.325，P=0.000；Ⅰ+Ⅱ級(jí)與Ⅲ級(jí)差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P=0.003）；Ⅰ+Ⅱ級(jí)與Ⅳ級(jí)的差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P=0.000）；Ⅲ級(jí)與Ⅳ級(jí)的差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P=0.001）。
　　3、Mig-7的Western-blot結(jié)果顯示：根據(jù)蛋白定量，單因素方差分析：F=97.537，P=0.000；Ⅰ+Ⅱ級(jí)與Ⅲ級(jí)差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P=0.000），Ⅰ+Ⅱ級(jí)與Ⅳ級(jí)差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P=0.001）,同時(shí)Ⅲ級(jí)與Ⅳ級(jí)差異

8、具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P=0.005），正常腦組織組織完全不表達(dá)。同時(shí)將膠質(zhì)瘤患者的Mig-7的western-blot表達(dá)量（低表達(dá)組≤0.4，0.4＜中表達(dá)組≤0.6，高表達(dá)組＞0.6）與其生存時(shí)間做生存分析，發(fā)現(xiàn)低表達(dá)組平均生存時(shí)間為75.83月，中位生存時(shí)間為85.00月；中表達(dá)組平均生存時(shí)間為40.11，中位生存時(shí)間為36.00；高表達(dá)組平均生存時(shí)間為12.88，中位生存時(shí)間為10.00,（P＜0.05）。
　　4、Mig-7

9、 RNA干擾技術(shù)結(jié)果顯示：成功篩選出Mig-7 shRNA，并通過qPCR檢測(cè)U87組、vector組及Mig-7 shRNA組之間Mig-7RNA表達(dá)的差異性，即Mig-7 shRNA組與U87組、vector組差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）5、Transwell小室檢測(cè)表明：Mig-7 shRNA組與U87組、vector組差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）；但U87組和vector組差異沒有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。