Annexin Ⅱ在肺鱗癌、腺癌的表達及意義.pdf

1、膜連蛋白Ⅱ(Annexin Ⅱ)屬于膜連蛋白家族中的一員，又被稱為Annexin A2、Calpactin重鏈、LipocortinⅡ、P36，是一類鈣依賴性磷脂結合蛋白，在許多的細胞功能中發(fā)揮作用，如細胞凋亡，信號轉導以及細胞的運動能力。Annexin Ⅱ存在于內皮細胞、單核細胞、巨噬細胞、神經細胞和一些腫瘤細胞中，其位于細胞質及細胞膜的胞質面。它在增生和轉化的細胞中高表達，在終末分化的細胞中低表達。近年來，研究發(fā)現(xiàn)annexinⅡ在

2、胃癌、結腸癌、前列腺癌、肝細胞肝癌、胰腺導管腺癌等腫瘤中異常表達，與腫瘤的侵潤轉移或預后相關。目前，關于肺鱗癌、腺癌中annexin Ⅱ的表達與腫瘤的惡性程度及侵襲轉移能力均不清楚。本研究通過檢測肺鱗癌、腺癌及癌旁肺組織中AnnexinⅡ的表達情況，分析其與臨床病理因素的關系，探討AnnexinⅡ在肺癌發(fā)生發(fā)展中的作用。并通過檢測不同侵襲能力肺癌細胞系Annexin Ⅱ蛋白表達水平，提示annexinⅡ在肺癌細胞中表達的差異可能與肺癌細

3、胞的體外侵襲能力相關。 材料與方法 1、免疫組織化學 S-P法檢測120例肺鱗癌、腺癌組織標本，標本來自中國醫(yī)科大學第一附屬醫(yī)院2000～2006年外科手術切除之原發(fā)性肺癌組織，所有患者術前均未接受過任何系統(tǒng)的放療或化療。 標本用中性福爾馬林溶液固定，石蠟包埋，制成4μm切片，經脫蠟、脫苯、水化后采用鏈菌素抗生物素蛋白-過氧化物酶免疫組化法(S-P法)檢測Annexin Ⅱ蛋白(1：200)表達，以PBS

4、代替一抗作為陰性對照。結果判定：Annexin Ⅱ以腫瘤細胞胞膜及胞漿內出現(xiàn)棕黃色顆粒為陽性表達，以染色強度和陽性細胞數(shù)比例評定陽性表達。光鏡下每張切片選取癌細胞較多的5個高倍視野，每個視野計數(shù)100個細胞。著色強度分級為：無色(-)為0分、淺黃色(+)為1分、黃色及更深顏色(++)為2分．陽性細胞數(shù)分級為：≤50％為0分、51％-75％為1分、>75％為2分。兩項得分相乘結果≥2分為陽性病例。 2、Westem Blot

5、 采用40例新鮮肺鱗癌、腺癌及癌旁正常肺組織標本，均來自中國醫(yī)科大學第一附屬醫(yī)院2006年5月-2007年7月行外科手術切除的肺癌患者標本。人正常支氣管上皮細胞系HBE及人肺癌細胞系BE1、LH7、A549、A2為本實驗室凍存。提取組織與細胞蛋白，采用考馬斯亮藍法進行蛋白定量。取等量蛋白，進行SDS-聚丙烯酰胺凝膠電泳和轉印，一抗(anti-annexin，Ⅱ 1：200稀釋，anti-β-actin1：500稀釋)和辣根過氧化物酶標

6、記二抗(1：3000及1：2000稀釋)孵育，DAB顯色。以β-aetin為內對照，結果判定為PVDF膜上出現(xiàn)灰色條帶，并對條帶進行灰度值測定。 3、統(tǒng)計分析 應用SPSS13.0統(tǒng)計軟件分析數(shù)據(jù)，P<0.05為有統(tǒng)計學意義。 結果: 1、Annexin Ⅱ在肺鱗癌、腺癌和癌旁正常肺組織中的表達 40例新鮮肺鱗癌、腺癌組織及相應癌旁正常肺組織進行Western Blot分析，結果顯示：Annexi

7、n Ⅱ在肺鱗癌、腺癌和癌旁組織中均有表達，分子量約為36KDa，在癌組織中的表達明顯高于癌旁正常肺組織(P=0.02)。 免疫組織化學S-P法檢測120例肺鱗癌、腺癌組織中Annexin Ⅱ的定位和表達情況。結果顯示：120例肺癌組織中，79例(65.8％)肺癌組織的癌細胞胞膜及胞漿中出現(xiàn)棕黃色顆粒。 2、Annexin Ⅱ蛋白在肺癌細胞系中的表達 Annexin Ⅱ在四種肺癌細胞系及人支氣管上皮細胞系均有表達，

8、但肺癌細胞系中蛋白的表達量高于人正常支氣管上皮細胞；高侵襲能力肺巨細胞癌細胞BElannexin Ⅱ的蛋白表達量明顯高于低侵襲能力肺巨細胞癌細胞LH7。 3、Annexin Ⅱ的表達與肺鱗癌、腺癌臨床病理特征間的關系 對120例肺鱗癌、腺癌組織中annexin Ⅱ的表達情況進行X2檢驗、統(tǒng)計學分析，結果顯示：Annexin Ⅱ的表達與分化程度(p=0.000)，臨床分期(p=0.021)，淋巴結轉移(p=0.030)有關