快速制備骨質(zhì)疏松動(dòng)物模型的實(shí)驗(yàn)性研究.pdf

1、目的：探討一種快速、簡便、經(jīng)濟(jì)的方法建立骨質(zhì)疏松模型，并通過QCT進(jìn)行骨質(zhì)疏松定量分析，然后生物力學(xué)測試比較分析，論證此方法的可行性和優(yōu)越性，為后期提供大量動(dòng)物模型進(jìn)行設(shè)計(jì)修改和測試提供了客觀依據(jù)與理論支持。 方法： 1．脫鈣液(EDTA)的配制將二乙胺四乙酸的二鈉鹽(EDTA)配制成濃度約為18％的脫鈣液。 2．標(biāo)本分組 1.5歲左右健康雌性新鮮成都山羊股骨80對，將表面清理干凈后隨機(jī)分為四組：G0(對照組20

2、對)； G1(1～5天組20對)；G2(6～10天組20對)；G3(11～15天組20對)。 3．動(dòng)物模型制備及脫鈣方法將表面清理干凈的新鮮羊股骨(80對)先共同放置在10％甲醛液內(nèi)固定24h，清水沖洗干凈。在股骨髁間和股骨梨狀窩處分別用3mm鉆頭鉆孔。將除對照組以外的三組實(shí)驗(yàn)組分別放在三個(gè)容器中，將配制好的脫鈣液(18％EDTA)盛入容器中，要將標(biāo)本完全浸泡其中。按照分組方式每天取出4對羊股骨。脫鈣液每5天更換一次。

3、4．骨質(zhì)疏松動(dòng)物模型的定量分析按照設(shè)定好的QCT掃描參數(shù)對羊股骨髁進(jìn)行掃描。分別對羊股骨髁的內(nèi)外側(cè)髁進(jìn)行測定，記錄數(shù)據(jù)，并將所得數(shù)據(jù)輸入QCT-3000 Bone Densitometry Report軟件，計(jì)算出BMD。 5．生物力學(xué)分析將對照組(20對)和實(shí)驗(yàn)組(60對)依次固定在電子萬能試驗(yàn)機(jī)上，進(jìn)行整體骨三點(diǎn)彎曲試驗(yàn)和骨試件拉伸和壓縮極限強(qiáng)度試驗(yàn)。根據(jù)應(yīng)力-應(yīng)變公式，計(jì)算出相應(yīng)的力學(xué)參數(shù)。 6．統(tǒng)計(jì)學(xué)分析結(jié)果：

4、 1.QCT測試： (1)羊股骨外側(cè)髁骨密度：采用單因素方差分析進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析：F=54.919，P<0.01，四組間總的差別是有顯著性，進(jìn)一步進(jìn)行均數(shù)間兩兩比較，P<0.05，說明差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。即骨密度由高到低依次為：G0組(對照組)、G1組(1-5天組)、G2組(6-10天組)、G3組(11-15天)。按WHO制定的骨質(zhì)疏松診斷標(biāo)準(zhǔn)：G2、G3組均數(shù)可達(dá)到此標(biāo)準(zhǔn)；按中國人群原發(fā)性骨質(zhì)疏松癥的診斷標(biāo)準(zhǔn)：G3組均數(shù)可

5、達(dá)到此標(biāo)準(zhǔn)。 (2)羊股骨內(nèi)側(cè)髁骨密度：F=220.798，P<0.01，四組間總的差別是有顯著性，各組兩兩比較P值均<0.01，說明差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。即骨密度由高到低依次為：G0組、G1組、G2組、G3組。按WHO制定的骨質(zhì)疏松診斷標(biāo)準(zhǔn)：G2、G3組均數(shù)可達(dá)到此標(biāo)準(zhǔn)；按中國人群原發(fā)性骨質(zhì)疏松癥的診斷標(biāo)準(zhǔn)：G2、G3組均數(shù)可達(dá)到此標(biāo)準(zhǔn)。 (3)羊股骨內(nèi)外側(cè)髁骨密度比較結(jié)果分析：羊股骨內(nèi)外側(cè)髁骨密度各組均P<0.01，說

6、明羊股骨內(nèi)外側(cè)髁骨密度比較有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，羊股骨外側(cè)髁明顯比內(nèi)側(cè)髁骨密度高。 2.生物力學(xué)測試 (1)整體羊股骨彎曲力學(xué)性能參數(shù)變化：①破壞荷載F=13.646，P<0.01，四組間總的差別是有顯著性，G0與G1比較，P=0.497>0.05，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；G0與G2、G3比較，P<0.05，說明G0與G2、G3的差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；G1與G2、G3比較，P<0.01，說明G1與G2、G3的差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；G2與G3比

7、較，P=0.017<0.05，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。②極限強(qiáng)度F=25.339，P<0.01，四組間總的差別是有顯著性，G0與G1比較，P=0.424>0.05，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；G0與G2、G3比較，P<0.01，說明G0與G2、G3的差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；G1與G2、G3比較，P<0.01，說明G1與G2、G3的差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；G2與G3比較，P＝0.752>0.05，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。③彈性模量 F=21.484，P<0.01，四組間總

8、的差別是有顯著性，G0與G1比較，P=0.236>0.05，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；G0與G2、G3比較，P<0.01，說明G0與G2、G3的差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；G1與G2、G3比較，P<0.01，說明G1與G2、G3的差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；G2與G3比較，P<0.01，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。 (2)羊股骨試件壓縮、拉伸力學(xué)參數(shù)變化：①壓縮極限強(qiáng)度F＝8.753，P<0.01，四組間總的差別是有顯著性，G0與G1比較，P=0.103>0.05，

9、差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；G0與G2、G3比較，P<0.01，說明G0與G2、G3的差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；G1與G2比較，P=0.147>0.05，說明差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；G1與G3比較，P=0.003<0.01，說明差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；G2與G3比較，P＝0.095>0.05，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。②拉伸極限強(qiáng)度組間分析F=7.164，P<0.01，四組間總的差別是有顯著性，G0與G1比較，P=0.007<0.01，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；G0與G2、G3比較

10、，P(0.01，說明G0與G2、G3的差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；G1與G2比較，P=0.6797>0.05，說明差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；G1與G3比較，P=0.144>0.05，說明差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；G2與G3比較，P=0.286>0.05，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。 結(jié)論： 1.EDTA是二乙胺四乙酸的二鈉鹽，是一種優(yōu)良的脫鈣螯合劑，它的脫鈣作用優(yōu)于酸性溶液，對組織破壞極小，能保持組織細(xì)胞的完整結(jié)構(gòu)，尤其細(xì)胞顯微化學(xué)改變甚微，能保存組織中的