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文檔簡介
1、該文利用桿狀病毒表達系統(tǒng)對PTH基因進行了在真核細胞中的表達.將完整的PTH基因克隆到供體質(zhì)粒pFastBacl中,在DH10BAC中通過size-specific轉(zhuǎn)座得到重組bacmid并轉(zhuǎn)染昆蟲細胞,使PTH基因在真核(昆蟲細胞中獲得了表達,表達產(chǎn)量占可溶性蛋白的32.5﹪,經(jīng)貿(mào)部25MG/10<'9>細胞.經(jīng)C<,18>小柱純化后,進行免疫原性和生物活性的測定并與在原核細胞中表達的PTH進行了比較.結(jié)果發(fā)現(xiàn)真核細胞表達的PTH在分
2、子量大小、免疫原性方面均與天然的PTH及原核表達的PTH無顯著性差異.體外生物活性測定方面,與bPTH<,1-34>標(biāo)準(zhǔn)品及原核表達PTH相近.該項研究的結(jié)果顯示:1、利用原核和真核細胞成功地、高水平地表達了完整的人PTH.2、兩種系統(tǒng)表達的重組PTH在分子量、免疫原性及體外生物活性等方面均與天然的PTH非常相似.3、在對大鼠骨質(zhì)疏松的療效方面,PTH不僅可以恢復(fù)去卵巢大鼠丟失的骨量而且以10.0nmol/Kg體重給予PTH還可以使去卵
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