D-聚甘酯的藥代動(dòng)力學(xué)-藥效學(xué)（PK-PD）及作用機(jī)制的系列研究.pdf

1、目的：1、建立D-聚甘酯的血漿濃度分析法，對(duì)比研究大鼠單次及連續(xù)7日靜脈注射和灌胃口服D-聚甘酯后的藥代動(dòng)力學(xué)及藥效學(xué)，為該藥兩種劑型的給藥方案設(shè)計(jì)及在治療缺血性腦血管病中的藥物定位提供科學(xué)依據(jù)。2、建立大鼠大腦中動(dòng)脈腦缺血再灌注動(dòng)物模型，觀察D-聚甘酯對(duì)局灶性腦缺血再灌注大鼠的保護(hù)作用及腦組織內(nèi)的MDA，SOD，GSH-PX，TXB2，6-Keto-PGF<,1>。的含量，探討其可能的藥理作用機(jī)制。3、觀察不同分子量的D-聚甘酯對(duì)大鼠

2、的抗栓作用的研究。 方法：1、應(yīng)用aPTT生物分析法檢測(cè)血漿D-聚甘酯濃度。采用DAS2.1.1版計(jì)算藥代動(dòng)力學(xué)參數(shù)，半衰期(t<,1/2>)及消除速率常數(shù)按非房室模型計(jì)算。采用t-檢驗(yàn)統(tǒng)計(jì)分析單次及連續(xù)7日給藥后的藥代動(dòng)力學(xué)參數(shù)差異和靜脈給藥與灌胃口服的差異。2、采用栓線法建立大鼠局灶性腦缺血再灌注模型。連續(xù)靜脈注射給藥7天，TTC染色法測(cè)定腦缺血大鼠腦梗塞面積，干濕重法測(cè)定腦水腫，HE染色觀察腦組織形態(tài)。在IR24h、IR7

3、2h、IR144h，制成腦組織勻漿，按試劑盒方法分別測(cè)定MDA，SOD，GSH-PX，TXB2，6-Keto-PGF<,1>。的含量。3、正常大鼠注射不同分子量的D-聚甘酯后1h，測(cè)定血漿的凝血及抗栓指標(biāo)。 結(jié)果：1、建立了aPTT延長(zhǎng)效應(yīng)的生物分析法。大鼠分別單次靜脈注射(9mg/kg)和灌胃口服(60mg/kg)D-聚甘酯后，藥時(shí)曲線符合二房室模型，權(quán)重系數(shù)采用1。末端消除速率常數(shù)Zata為0.89 h<'-1>～1.06

4、h<,-1>和消除半衰期t<,1/2z>為0.69h～0.78h，口服吸收少，生物利用度較低，約為3％～5％。表觀分布容積Vd遠(yuǎn)小于1 L·kg<'-1>。連續(xù)7日靜脈注射9mg/kg和灌胃口服60mg/kg后，第7日給藥的藥代動(dòng)力學(xué)參數(shù)比較與單次給藥相似，特別是Zata和t<,1/2z>與單次給藥結(jié)果基本一致，表明多次給藥并未影響本藥的消除和代謝，未出現(xiàn)多次給藥后藥物蓄積現(xiàn)象。大鼠在靜脈注射給予D-聚甘酯后，藥物的抗凝作用與血藥濃度同

5、步增高，約6h后，aPTT恢復(fù)至正常波動(dòng)水平，藥物的抗凝效應(yīng)消失，而連續(xù)給藥7日后，靜脈注射的aPTT最大值約為單次靜脈給藥的2倍，但灌胃口服卻未見(jiàn)抗凝效應(yīng)的顯著增強(qiáng)。 2、D-聚甘酯、尼莫地平、低分子肝素給藥組，大鼠神經(jīng)功能缺失評(píng)分逐漸減輕，在IR144h與對(duì)照組相比(p<0.05)。并可明顯降低腦缺血再灌注大鼠的腦梗塞面積(p<0.05)。HE染色，對(duì)照組神經(jīng)細(xì)胞損傷及間質(zhì)水腫逐漸加重，給藥組可明顯降低神經(jīng)細(xì)胞死亡。對(duì)照組與

6、假手術(shù)組相比，D-聚甘酯的藥代動(dòng)力/藥效學(xué)(PK/PD)及作用機(jī)制的系列研究MDA含量明顯增高(p<0.01)，SOD、GSH-PX含量明顯下降(p<0.05)。D-聚甘酯、尼莫地平給藥組的MDA含量在IR 144h明顯下降到再灌前的水平(p>0.05)，與對(duì)照組比較(p<0.05)，SOD、GSH-PX的含量與對(duì)照組IR 144h比較(p<0.05)。對(duì)照組與假手術(shù)組相比，TXB<,2>的含量在不同時(shí)間顯著增加(p<0.05)，6-K

7、eto-PGF<,1>的含量急劇降低(p<0.01)，TXB<,2>/6-Keto-PGF<,1>的比值明顯升高(p<0.01)。D-聚甘酯給藥組可明顯降低缺血側(cè)TXB<,2>含量，與假手術(shù)組、對(duì)照組、尼莫地平給藥組相比(p<0.05)，在IR144h，6-Keto-PGF<,1>。明顯上升，與假手術(shù)組相比(p>0.05)，與對(duì)照組、尼莫地平給藥組相比(p<0.05)，TXB<,2>/6-Keto-PGF<,1>。的比值隨時(shí)間，呈明顯降

8、低趨勢(shì)，與假手術(shù)相比(p>0.05)，在IRl44h與對(duì)照組、尼莫地平給藥組相比(p<0.05)。 3、D-聚甘酯Ⅰ，血漿APTT延長(zhǎng)顯著，PT和FIB與對(duì)照組和低分子肝素組相比都有顯著性差異，抗FⅡa活性高于低分子肝素組和D-聚甘酯Ⅱ、Ⅲ組，有顯著性差異?？笷 Ⅹa/F Ⅱa比值，D-聚甘酯Ⅰ明顯低于其余各組。 結(jié)論：1、本試驗(yàn)所建立的生物法來(lái)測(cè)定大鼠體內(nèi)血漿中的D-聚甘酯濃度，分析方法的特異性、靈敏度、精密度、回收率

9、等均基本滿足化學(xué)藥品藥物代謝動(dòng)力學(xué)研究的技術(shù)要求。本研究表明D-聚甘酯抗凝效應(yīng)與血漿藥物濃度同步，呈良好的線性相關(guān)關(guān)系，首次發(fā)現(xiàn)D-聚甘酯的大鼠血漿t<,1/2z>為1h左右，體內(nèi)發(fā)揮抗凝血效應(yīng)時(shí)間約為6h，最大效應(yīng)與血藥濃度間未出現(xiàn)滯后效應(yīng)，大鼠單次及多次給藥對(duì)D-聚甘酯的主要藥代動(dòng)力學(xué)參數(shù)無(wú)影響，連續(xù)7日應(yīng)用未出現(xiàn)藥物蓄積，注射液藥理藥效藥代具有與低分子肝素相同的臨床特點(diǎn)，而灌胃口服則與阿司匹林的預(yù)防作用特點(diǎn)類似。 2、D-

10、聚甘酯連續(xù)給藥7天后，MCAO再灌注大鼠神經(jīng)功能缺失評(píng)分有明顯改善，可以降低大鼠的腦梗塞面積，并對(duì)腦缺血具有保護(hù)作用。D-聚甘酯可清除缺血性腦組織中的大量自由基，減輕自由基反應(yīng)引起的腦損傷。D-聚甘酯使缺血性腦組織中TXB<,2>的含量明顯降低，對(duì)6-Keto-PGF<,1>的含量，開(kāi)始降低而后可使其含量恢復(fù)到再灌注前水平，D-聚甘酯可顯著降低TXB<,2>/6-Keto-PGF的比值，具有抗血栓作用。 3、不同分子量的D-聚甘