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1、視網(wǎng)膜母細(xì)胞瘤(retinoblastoma,RB)是嬰幼兒最常見(jiàn)的眼內(nèi)惡性腫瘤,該病嚴(yán)重威脅患者的視力和生命。傳統(tǒng)的治療方法或存在應(yīng)用的局限性,或存在遠(yuǎn)期毒副作用。隨著腫瘤分子生物學(xué)的發(fā)展,基因治療作為一種新的治療策略,已越來(lái)越受到人們的重視。其中,自殺基因治療惡性腫瘤是國(guó)內(nèi)外研究的熱點(diǎn)。本實(shí)驗(yàn)嘗試構(gòu)建腫瘤特異性雙自殺基因載體pc-DNA3.1-CMV-hTERT-CDTK(pc-ChCDTK),在此基礎(chǔ)上研究其對(duì)人視網(wǎng)膜母細(xì)胞瘤Y7
2、9細(xì)胞在體內(nèi)外的殺傷作用。 目的:構(gòu)建腫瘤特異性雙自殺基因載體pc-ChCDTK。 方法:利用PCR擴(kuò)增CMV增強(qiáng)子、hTERT啟動(dòng)子、yCD及TKgly 4種元件,并構(gòu)建過(guò)渡載體T-CMV、T-hTERT、T-yCD、T-TKgly,連至pc-DNA3.1(-)質(zhì)粒載體上構(gòu)建成雙自殺基因載體pc-DNA3.1-CMV-hTERT-CDTK(pc-ChCDTK);對(duì)各個(gè)元件、過(guò)渡載體及最終載體進(jìn)行瓊脂糖凝膠電泳、酶切和測(cè)
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