AG490對(duì)人視網(wǎng)膜母細(xì)胞瘤HXO-RB44細(xì)胞株JAK2-STAT3信號(hào)通路的影響.pdf

1、目的: 研究JAK激酶抑制劑AG490干預(yù)JAK2/STAT3信號(hào)通路后對(duì)人視網(wǎng)膜母細(xì)胞瘤HXO-RB44細(xì)胞株體外抗增殖及細(xì)胞周期的作用，并觀察AG490對(duì)HXO-RB44細(xì)胞株中STAT3，p-STAT3，VEGF蛋白表達(dá)的影響。探討JAK3/STAT3信號(hào)通路及VEGF在RB發(fā)展中的作用，評(píng)估其在藥物靶向治療RB的可能性。
　　方法: (1)培養(yǎng)人視網(wǎng)膜母細(xì)胞瘤HXO-RB44細(xì)胞株，觀察活細(xì)胞生長(zhǎng)情況。(2)實(shí)驗(yàn)分組及檢測(cè)

2、:本實(shí)驗(yàn)分為實(shí)驗(yàn)組和對(duì)照組，實(shí)驗(yàn)組又分為A、B、C、D、E、F組，HXO-RB44細(xì)胞株加入不同濃度的AG490處理，藥物濃度依次為6.25μM，12.5μM，25.0μM，50μM，100μM，200μM。對(duì)照組:不加任何藥物處理，僅加RPMI-1640培養(yǎng)液進(jìn)行培養(yǎng)。選用處于對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的HXO-RB44細(xì)胞，加入不同濃度的JAK抑制劑AG490進(jìn)行干預(yù)。用下列方法進(jìn)一步研究:1）采用MTS試劑盒對(duì)各組細(xì)胞進(jìn)行處理并檢測(cè)其增殖狀態(tài)。2

3、）應(yīng)用流式細(xì)胞學(xué)技術(shù)對(duì)各組中細(xì)胞凋亡及周期進(jìn)行分析。3)Western blot法檢測(cè)各組中STAT3、p-STAT3及VEGF蛋白的表達(dá)。
　　結(jié)果: JAK激酶抑制劑AG490處理HXO-RB4448小時(shí)后:(1) MTS法檢測(cè)顯示:AG490實(shí)驗(yàn)組(6.25μM，12.5μM，25μM，50μM，100μM，200μM)隨著藥物濃度的增加，細(xì)胞抑制率增加，細(xì)胞存活率下降。六個(gè)實(shí)驗(yàn)組的細(xì)胞抑制率平均值依次為:7.18±8.7

4、8％，20.02±2.21％，31.92±5.30％，58.61±4.27％，62.17±6.05％，72.67±1.51％，有逐漸增高的趨勢(shì)，與對(duì)照組兩兩相比較，6.25μM實(shí)驗(yàn)組差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)，其余五組均有顯著差異，有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。(2)流式細(xì)胞技術(shù)顯示:根據(jù)MTS實(shí)驗(yàn)結(jié)果篩選5個(gè)不同濃度的實(shí)驗(yàn)組（6.25μM,12.5μM，25μM，50μM，100μM）的細(xì)胞,隨著AG490藥物濃度的增加細(xì)胞凋亡

5、率呈逐漸增高趨勢(shì)，依次為:8.94±2.21％，12.86±2.12％，13.59±1.22％，26.51±2.01％，35，37±1.95％，與對(duì)照組（凋亡率平均值:4.10±2.35％）相比，有顯著差異，具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。50μM和100μM與對(duì)照組相比，細(xì)胞出現(xiàn)G0/G1期阻滯現(xiàn)象，G1期細(xì)胞比例顯著增多，相應(yīng)的處于S期的細(xì)胞比例減少，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。(3) Western Blot實(shí)驗(yàn)顯示:隨著

6、AG490藥物濃度的增加，STAT3蛋白的表達(dá)量逐漸下降，其灰度值依次為:2.11±0.23，1.77±0.18，1.27±0.18，1.15±0.19，0.77±0.11，與對(duì)照組（灰度值:3.84±0.21）相比，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05);p-STAT3表達(dá)量逐漸下降，其灰度值依次為:1.12±0.12，1.11±0.11，0.82±0.09，0.38±0.04，0.35±0.04，與對(duì)照組（灰度值:1.52±0.14）相比

7、，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05); VEGF表達(dá)量逐漸下降，其灰度值依次為:2.56±0.11，2.51±0.14，1.96±0.18，1.81±0.12,1.31±0.06，與對(duì)照組（灰度值:2.61±0.15）相比，6.25μM，12.5μM，實(shí)驗(yàn)組差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)，其余各實(shí)驗(yàn)組差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。
　　結(jié)論: (1)JAK激酶抑制劑AG490抑制了HXO-RB44細(xì)胞株生長(zhǎng)及增殖，呈濃度依賴性