JAK激酶抑制劑AG490阻斷STAT3信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路介導(dǎo)上皮性卵巢癌細(xì)胞凋亡的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、在婦科惡性腫瘤中，卵巢癌是死亡率最高的惡性腫瘤，雖然手術(shù)、化療等治療手段不斷改進(jìn)，但晚期卵巢癌存活率仍然很低。因此，尋找一種新的、有效的治療卵巢惡性腫瘤的方法成為近年來的研究熱點(diǎn)。隨著分子生物學(xué)不斷發(fā)展和深入，細(xì)胞間與細(xì)胞內(nèi)的信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路在惡性腫瘤發(fā)生發(fā)展中作用越來越引起人們重視。大量研究表明JAK/STAT3信號轉(zhuǎn)導(dǎo)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路是多種腫瘤細(xì)胞生長、分化、凋亡等的重要通道。且前期課題也表明在上皮性卵巢腫瘤細(xì)胞中，STAT3高表達(dá)。而阻斷劑之

2、一的AG490可以阻斷其信號轉(zhuǎn)導(dǎo)過程，具有重要的研究價(jià)值與應(yīng)用前景。本課題以此出發(fā)，初步探討了JAK激酶抑制劑AG490阻斷STAT3信號轉(zhuǎn)導(dǎo)介導(dǎo)上皮性卵癌細(xì)胞凋亡的體外研究，為卵巢癌的治療提供一種新的實(shí)驗(yàn)依據(jù)。
　　 目的：本研究應(yīng)用JAK激酶抑制劑AG490阻斷STAT3信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路，探討其對上皮性卵巢癌細(xì)胞增殖與凋亡的影響及STAT3信號分子對凋亡相關(guān)因子Survivin mRNA表達(dá)的調(diào)控；并研究JAK激酶抑制劑AG49

3、0阻斷STAT3信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路治療卵巢惡性腫瘤的可行性與分子基礎(chǔ)，為卵巢惡性腫瘤的治療提供理論基礎(chǔ)和實(shí)驗(yàn)依據(jù)。
　　 方法：應(yīng)用不同濃度的JAK激酶抑制劑AG490作用于人卵巢癌上皮細(xì)胞SKOV3，MTT法分別檢測AG490作用后24h、48h、72h卵巢癌細(xì)胞SKOV3的增殖抑制情況；流式細(xì)胞技術(shù)動態(tài)觀察AG490阻斷STAT3信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路后，對SKOV3細(xì)胞的細(xì)胞周期、凋亡狀況的影響；RT-PCR法檢測卵巢癌上皮細(xì)胞在AG49

4、0作用前后的STAT3及Survivin mRNA表達(dá)情況。
　　 結(jié)果：
　　 1 AG490對卵巢癌細(xì)胞SKOV3細(xì)胞株增殖影響情況
　　 AG490能夠抑制卵巢癌SKOV3細(xì)胞增殖，隨AG490藥物濃度和作用時(shí)間增加細(xì)胞增殖抑制率上升。各時(shí)間組不同作用濃度比較細(xì)胞增殖抑制率有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P＜0.01)，同一濃度組不同作用時(shí)間比較也有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P＜0.05)，且呈明顯的時(shí)間效應(yīng)關(guān)系。
　　 2 AG

5、490對卵巢癌細(xì)胞SKOV3細(xì)胞株細(xì)胞周期、凋亡狀況的影響
　　 AG490能夠促進(jìn)卵巢癌SKOV3細(xì)胞凋亡，在作用48h后，隨著AG490濃度的增加卵巢癌細(xì)胞的凋亡率增加。本研究中應(yīng)用不同濃度AG490作用于SKOV3細(xì)胞，80μmol/L的藥物濃度組卵巢癌細(xì)胞的平均凋亡率為39.3±0.8％，較其它濃度組與對照組細(xì)胞凋亡率明顯增加，有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P＜0.05)。
　　 3 AG490作用組的STAT3與Survivi

6、n mRNA的表達(dá)水平較對照組明顯降低(P＜0.05)，并隨著藥物濃度的增加STAT3與Survivin mRNA的表達(dá)水平降低。
　　 結(jié)論：STAT3、Survivin等基因在卵巢癌細(xì)胞增殖、凋亡過程中起關(guān)鍵性作用，AG490可通過阻斷STAT3信號途徑抑制卵巢癌細(xì)胞增長，并誘導(dǎo)其凋亡，隨著藥物濃度的增加與作用時(shí)間的延長，細(xì)胞的抑制率呈上升趨勢，且AG490作用后Survivin mRNA的表達(dá)降低，Survivin等因子的