靶向腫瘤（干）細(xì)胞STAT3信號(hào)通路抑制劑Angoline構(gòu)效關(guān)系及其結(jié)構(gòu)優(yōu)化.pdf

1、目的:
　　先導(dǎo)化合物Angoline是從兩面針中分離得到的一種選擇性STAT3信號(hào)通路抑制劑。本論文設(shè)計(jì)、合成Angoline系列衍生物并評(píng)價(jià)其對(duì)人肝癌細(xì)胞的抑制活性，并研究其構(gòu)效關(guān)系;然后初步探討Angoline抑制人肝癌干細(xì)胞(HLCSCs)的自我更新生物活性以及誘導(dǎo)HLCSCs凋亡的作用機(jī)理;最后闡明Angoline可能作用于STAT3蛋白的分子作用模式。
　　方法:
　?、倮霉枘z柱層析從中藥兩面針根甲醇提取

2、物中分離得到白屈菜紅堿;②然后以白屈菜紅堿為母核，通過親核取代反應(yīng)和氧化還原反應(yīng)等方法修飾合成Angoline系列衍生物;③綜合運(yùn)用NMR和MS等波譜學(xué)方法表征化合物結(jié)構(gòu);④采用MTT法評(píng)價(jià)系列衍生物對(duì)人肝癌細(xì)胞的抑制活性;⑤利用流式細(xì)胞儀檢測(cè)Angoline對(duì)HLCSCs的細(xì)胞凋亡和細(xì)胞周期的影響;⑥利用分子對(duì)接技術(shù)闡明Angoline及其系列衍生物作用于STAT3的分子作用模式。
　　結(jié)果:
　?、?gòu)膬擅驷樃o甲醇提取物

3、中分離得到200mg白屈菜紅堿，得率約為4.00％;②設(shè)計(jì)、合成和鑒定了12個(gè)Angoline衍生物，獲得了幾個(gè)活性較好的化合物:DY30105(IC50=0.45μM)、DY20101（IC50=0.55μM）、氯化兩面針堿(IC50=5.44μM)、血根堿(IC50=6.80μM);但是相比Angoline(IC50=0.05μM)，活性還是偏弱;③構(gòu)效結(jié)構(gòu)結(jié)果顯示:甲氧基是關(guān)鍵的藥效基團(tuán)，C8、C9位的甲氧基對(duì)人肝癌細(xì)胞的抑制活性

4、有重要影響，在C8上引入烷基或氮雜環(huán)等可明顯減弱對(duì)人肝癌細(xì)胞的抑制活性;④Angoline能劑量依賴性地誘導(dǎo)人肝癌干細(xì)胞的凋亡，并將細(xì)胞生長(zhǎng)阻滯在S期;⑤分子對(duì)接結(jié)果顯示，Angoline與SH2結(jié)構(gòu)域的谷氨酰胺(GIn635)、賴氨酸(Lys591)和異亮氨酸(IIe634)殘基同時(shí)形成arene-H鍵，并與SH2結(jié)構(gòu)域上離子化的精氨酸（Arg595）殘基形成arene-cation鍵。
　　結(jié)論:
　　本論文研究了先導(dǎo)化

5、合物Angoline抑制STAT3信號(hào)通路的構(gòu)效關(guān)系，C8、C9上的甲氧基取代是其關(guān)鍵的藥效基團(tuán)，并獲得了4個(gè)藥理活性較好的STAT3小分子抑制劑如:DY30105、DY20101、氯化兩面針堿、血根堿;但是相比Angoline，活性還是偏弱;Angoline能劑量依賴性地誘導(dǎo)HLCSCs凋亡，并將人肝癌干細(xì)胞阻滯在S期;分子對(duì)接結(jié)果表明Angoline與SH2結(jié)構(gòu)域的谷氨酰胺(GIn635)、賴氨酸(Lys591)和異亮氨酸(IIe6