STAT3信號通路抑制劑及GK活化構象的研究.pdf

1、信號傳導與轉錄活化因子3（STAT3）信號通路在人類很多腫瘤細胞中都持續(xù)異?；罨?。在信號傳遞過程中主要由STAT3的Coiled-coil結構域和SH2結構域調控和介導與受體上磷酸化肽段結合位點相互作用并發(fā)生磷酸化，形成二聚體，隨后進入細胞核與DNA結合，啟動靶基因的轉錄。我們發(fā)現(xiàn)了2類STAT3抑制劑,分別是針對STAT3的Coiled-coil結構域的別構小分子K116和結合在STAT3的SH2結構域的小分子B9。
　　首先我

2、們通過結構依賴的虛擬篩選和熒光偏振的方法進行了初步篩，進而對化合物進行了改造。在體外分子水平，通過SPR技術檢測K116與STAT3結合的親和力Kd是2.397μM，與STAT3突變體（K591A，R595G，C712G，K591A/S611G，I634S/S635G）的Kd基本相同，與Coiled-coil結構域（CCD）的Kd是3.20μM，說明K116不結合在SH2，而是結合在CCD。B9與STAT3的Kd是4.59μM，而與I6

3、34S/Q635G突變體的親和力是22.75μM，下降了4倍，提示B9可能結合在SH2結構域。通過細胞水平的實驗，我們發(fā)現(xiàn)K116和B9都能夠選擇性的抑制含有持續(xù)異?；罨疭TAT3的腫瘤細胞系的生長，比如MDA-MB-468，MDA-MB-231和DU145細胞，但對含有正常水平活化STAT3的腫瘤細胞系生長抑制活性很低；降低MDA-MB-468細胞內(nèi)705位酪氨酸磷酸化的STAT3，和下游靶基因Cyclin D1,C-Myc和 Bcl

4、-xl的蛋白水平；B9對STAT3的轉錄活性和MDA-MB-468細胞的遷移能力都具有濃度依賴性的抑制；同時，K116具有抑制705位酪氨酸磷酸化的STAT3在MDA-MB-468細胞核內(nèi)聚集，遷移及促進凋亡的效應。因此，我們闡明了K116和B9分別是針對STAT3的CCD和SH2的新型小分子抑制劑，其后續(xù)優(yōu)化產(chǎn)物可能會成為潛在的針對含有持續(xù)活化STAT3的人類腫瘤的抗腫瘤先導化合物。
　　葡萄糖激酶（GK）是一個糖酵解酶在調控血