STAT3信號(hào)通路抑制劑及GK活化構(gòu)象的研究.pdf

1、信號(hào)傳導(dǎo)與轉(zhuǎn)錄活化因子3（STAT3）信號(hào)通路在人類很多腫瘤細(xì)胞中都持續(xù)異?；罨?。在信號(hào)傳遞過程中主要由STAT3的Coiled-coil結(jié)構(gòu)域和SH2結(jié)構(gòu)域調(diào)控和介導(dǎo)與受體上磷酸化肽段結(jié)合位點(diǎn)相互作用并發(fā)生磷酸化，形成二聚體，隨后進(jìn)入細(xì)胞核與DNA結(jié)合，啟動(dòng)靶基因的轉(zhuǎn)錄。我們發(fā)現(xiàn)了2類STAT3抑制劑,分別是針對(duì)STAT3的Coiled-coil結(jié)構(gòu)域的別構(gòu)小分子K116和結(jié)合在STAT3的SH2結(jié)構(gòu)域的小分子B9。
　　首先我

2、們通過結(jié)構(gòu)依賴的虛擬篩選和熒光偏振的方法進(jìn)行了初步篩，進(jìn)而對(duì)化合物進(jìn)行了改造。在體外分子水平，通過SPR技術(shù)檢測(cè)K116與STAT3結(jié)合的親和力Kd是2.397μM，與STAT3突變體（K591A，R595G，C712G，K591A/S611G，I634S/S635G）的Kd基本相同，與Coiled-coil結(jié)構(gòu)域（CCD）的Kd是3.20μM，說明K116不結(jié)合在SH2，而是結(jié)合在CCD。B9與STAT3的Kd是4.59μM，而與I6

3、34S/Q635G突變體的親和力是22.75μM，下降了4倍，提示B9可能結(jié)合在SH2結(jié)構(gòu)域。通過細(xì)胞水平的實(shí)驗(yàn)，我們發(fā)現(xiàn)K116和B9都能夠選擇性的抑制含有持續(xù)異?；罨疭TAT3的腫瘤細(xì)胞系的生長，比如MDA-MB-468，MDA-MB-231和DU145細(xì)胞，但對(duì)含有正常水平活化STAT3的腫瘤細(xì)胞系生長抑制活性很低；降低MDA-MB-468細(xì)胞內(nèi)705位酪氨酸磷酸化的STAT3，和下游靶基因Cyclin D1,C-Myc和 Bcl

4、-xl的蛋白水平；B9對(duì)STAT3的轉(zhuǎn)錄活性和MDA-MB-468細(xì)胞的遷移能力都具有濃度依賴性的抑制；同時(shí)，K116具有抑制705位酪氨酸磷酸化的STAT3在MDA-MB-468細(xì)胞核內(nèi)聚集，遷移及促進(jìn)凋亡的效應(yīng)。因此，我們闡明了K116和B9分別是針對(duì)STAT3的CCD和SH2的新型小分子抑制劑，其后續(xù)優(yōu)化產(chǎn)物可能會(huì)成為潛在的針對(duì)含有持續(xù)活化STAT3的人類腫瘤的抗腫瘤先導(dǎo)化合物。
　　葡萄糖激酶（GK）是一個(gè)糖酵解酶在調(diào)控血