Egr-1蛋白在心肌缺氧預(yù)適應(yīng)及藥物預(yù)適應(yīng)中作用的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、目的：缺血預(yù)適應(yīng)具有強(qiáng)大的內(nèi)源性保護(hù)作用，其發(fā)生機(jī)制尚不明確，維持細(xì)胞內(nèi)鈣穩(wěn)態(tài)可能是重要機(jī)制之一。缺血再灌注損傷是一種牽涉多因素參與的復(fù)雜的病理過程，可能構(gòu)成再灌注損傷多種因素的一種共同的分子基礎(chǔ)-早期生長(zhǎng)反應(yīng)因子(early growth response gene-1，Egr-1)，它在缺血造成組織損傷的病理過程中通過協(xié)調(diào)各種損傷因子的表達(dá)而發(fā)揮了中心調(diào)控作用，成為啟動(dòng)缺血性損傷的分子開關(guān)，Egr-1還影響SERCA2a及心肌β受體

2、表達(dá)，調(diào)控細(xì)胞內(nèi)鈣離子濃度。藥物可以模擬缺血預(yù)適應(yīng)，產(chǎn)生心肌保護(hù)作用，具有積極的臨床應(yīng)用前景。本實(shí)驗(yàn)旨在研究大鼠心肌轉(zhuǎn)錄因子Egr-1在缺氧預(yù)適應(yīng)與前胡丙素預(yù)適應(yīng)中的作用及機(jī)制。
　　 方法：1.用胰蛋白酶-膠原酶聯(lián)合消化法培養(yǎng)體外原代乳鼠心肌細(xì)胞；2.用化學(xué)耗氧法模擬體內(nèi)心肌缺血建立缺氧預(yù)適應(yīng)和缺氧-復(fù)氧損傷模型，建立藥物預(yù)處理模型，并隨機(jī)分成5個(gè)處理組，：正常培養(yǎng)組(Control)、腺苷預(yù)處理組(AP)、缺氧預(yù)適應(yīng)組(HP

3、)、藥物預(yù)處理組(PP)和缺氧-復(fù)氧損傷組(HR)。3.顯微鏡下觀察細(xì)胞搏動(dòng)頻率和形態(tài)；4.用乳酸-丙酮酸法檢測(cè)細(xì)胞上清LDH值和化學(xué)比色法檢測(cè)細(xì)胞上清CK值；5.用半定量RT-PCR法檢測(cè)Egr-1的基因轉(zhuǎn)錄水平；6.用免疫應(yīng)激法檢測(cè)Egr-1的蛋白表達(dá)水平。
　　 結(jié)果：1.細(xì)胞搏動(dòng)頻率及形態(tài)：缺氧預(yù)適應(yīng)及前胡丙素能提高缺氧復(fù)氧損傷心肌細(xì)胞搏動(dòng)頻率；心肌細(xì)胞缺氧復(fù)氧培養(yǎng)后皺縮、變圓，偽足減少，HP組及PP組心肌細(xì)胞形態(tài)變化小

4、于對(duì)照組；2.與正常培養(yǎng)組比較，模擬缺氧復(fù)氧組細(xì)胞上清中LDH和CK值明顯升高(P(0.05)；與模擬缺氧復(fù)氧組比較，HP組、PP組細(xì)胞上清中LDH和CK值明顯降低(P(0.05)；但前胡丙素預(yù)處理組與缺氧預(yù)適應(yīng)組之間無明顯差異(P>0.05)3.同缺氧-復(fù)氧損傷組(HR組)比較，缺氧預(yù)適應(yīng)組(HP組)、腺苷預(yù)處理組(AP組)、前胡丙素預(yù)處理組(PP組)的Egr-1基因轉(zhuǎn)錄明顯降低(P<0.05)，而且AP組及HP組和PP組之間無顯著差

5、異性(P>0.05)；4.同缺氧-復(fù)氧損傷組(HR組)比較，缺氧預(yù)適應(yīng)組(HP組)、腺苷預(yù)處理組(AP組)、前胡丙素預(yù)處理組(PP組)的Egr-1蛋白表達(dá)水平明顯降低(P<0.05)，而且AP組及HP組和PP組之間無顯著差異性(P>0.05)；
　　 結(jié)論：1.缺氧預(yù)適應(yīng)和前胡丙素明顯改善缺氧復(fù)氧損傷的心肌細(xì)胞形態(tài)、搏動(dòng)頻率，降低心肌細(xì)胞上清中LDH和CK值，對(duì)心肌細(xì)胞有一定程度的保護(hù)作用，其保護(hù)作用機(jī)制可能與前胡丙素能通過膜穩(wěn)