抑癌基因P53突變及多藥耐藥基因表達(dá)在上皮性卵巢癌多藥耐藥機(jī)制中的研究.pdf

1、目的： 檢測(cè)抑癌基因P53(突變型)、GST-π、MDR1在卵巢癌中的表達(dá)，并將測(cè)定結(jié)果結(jié)合卵巢癌臨床參數(shù)如臨床分期、病理類型、化療耐藥、化療史等進(jìn)行比較，了解P53、GST-π、MDR1在卵巢癌中的表達(dá)及其生物學(xué)行為、預(yù)后的關(guān)系；在體外細(xì)胞水平從細(xì)胞凋亡角度探討卵巢癌多藥耐藥的發(fā)生機(jī)制，進(jìn)一步闡明卵巢癌中細(xì)胞凋亡相關(guān)基因P53的突變與耐藥基因的關(guān)系，探討卵巢癌耐藥的機(jī)理，為指導(dǎo)臨床選擇合適的治療方案、判斷預(yù)后以及尋找有效的逆轉(zhuǎn)

2、腫瘤耐藥的方法提供理論依據(jù)。 方法： 1．采用RT-PCR法及SP免疫組化法檢測(cè)60例不同性質(zhì)卵巢組織中耐藥基因MDR1、GST-π、P53mRNA及其蛋白p-gP、 GST-π、P53的表達(dá)水平。 2．采用MTT法檢測(cè)不同濃度DDP3寸COC1及COC1/DDP細(xì)胞的抑制作用。流式細(xì)胞儀檢測(cè)不同濃度DDP作用COC1及COC1/DDP細(xì)胞后的凋亡變化。 3．RT-PCR半定量法測(cè)定不同濃度DDP作用于C

3、OC1及COC1/DDP細(xì)胞24h后P53、GST-π、MDR1mRNA含量的變化。 結(jié)果： 1．上皮性卵巢癌，良性上皮性腫瘤，正常卵巢組織中三種指標(biāo)的表達(dá)情況：MDR1蛋白依次為9/22、0/20、0/18，GST-π蛋白為16/22、0/20、0/18，p53蛋白為14/22、0/20、0/18；MDR1mRNA依次為12/22、0/20、0/18，GST-πmRNA為17/22、3/20、0/18，p53mRNA為

4、16/22、0/20、0/18，三個(gè)指標(biāo)在上皮性卵巢癌中的表達(dá)率顯著增高；化療耐藥與MDR1和GST-π相關(guān)；P53表達(dá)與腫瘤分期和組織分化程度相關(guān)；MDR1表達(dá)與組織分化程度相關(guān)；p53與MDR1表達(dá)具有一定相關(guān)性。 2．不同濃度DDP處理COC1及COC1/DDP細(xì)胞后，均有抑制細(xì)胞生長(zhǎng)及促凋亡作用，且呈時(shí)間和劑量依耐性。DDP濃度在2.5～10μg/mL內(nèi)，敏感細(xì)胞株凋亡率明顯高于耐藥細(xì)胞株，差異具有顯著性意義(P<0.0

5、5)。 3．COC1細(xì)胞中GST-π、P53mRNA呈弱表達(dá)，不同濃度DDP作用24h后，P53、GST-π表達(dá)明顯減弱，且呈濃度依耐性，MDR1未見表達(dá)；COC1/DDP細(xì)胞中P53、MDR1mRNA表達(dá)較COC1細(xì)胞增強(qiáng)，GST-πmRNA變化不明顯，不同濃度DDP作用后三者變化無顯著性差異。 結(jié)論： 1．P53、GST-π、MDR1在正常卵巢組織、良性卵巢腫瘤及卵巢癌中表達(dá)逐漸增強(qiáng)，提示三者均參與卵巢癌的形

6、成，并與耐藥有關(guān)。卵巢癌化療耐藥與耐藥基因GST-π、MDR1過表達(dá)及細(xì)胞凋亡相關(guān)基因P53突變密切相關(guān)，突變的P53可能通過調(diào)控耐藥基因GST-π、MDR1而間接發(fā)揮其耐藥作用。 2．P53蛋白表達(dá)與卵巢上皮性腫瘤的良惡性、腫瘤細(xì)胞的分化程度、患者的臨床分期有關(guān)，與惡性腫瘤的病理類型無關(guān)。P53蛋白表達(dá)可作為卵巢癌預(yù)后與耐藥的一個(gè)指標(biāo)。 3．GST-π、MDR1基因表達(dá)與卵巢癌化療具有一定的相關(guān)性，在卵巢癌化療耐藥組G

7、ST-π、MDR<,1>基因表達(dá)增高。因此在判斷臨床用藥時(shí)檢測(cè)多藥耐藥相關(guān)基因的表達(dá)，可得到一定的耐藥信息，有助于臨床化療方案的制定。p53的表達(dá)與MDR1陽性率存在一定的相關(guān)性，卵巢癌耐藥可能與細(xì)胞凋亡相關(guān)。 4．不同濃度DDP可抑制COC1、COC1/DDP細(xì)胞增殖，并且具有時(shí)間-劑量依耐性。DDP對(duì)COC1細(xì)胞作用更明顯。 5．誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡是順鉑作用機(jī)制之一，順鉑可誘導(dǎo)卵巢癌COC1、COC1/DDP細(xì)胞凋亡，獲得

8、性耐藥與腫瘤細(xì)胞凋亡有關(guān)。 6．COC1/DDP細(xì)胞中P53、MDR1表達(dá)較COC1細(xì)胞增強(qiáng)，不同濃度DDP作用COC1細(xì)胞后，P53表達(dá)明顯減弱，呈濃度依耐性，而作用COC1/DDP細(xì)胞后，P53變化無顯著性。卵巢癌順鉑耐藥的產(chǎn)生可能與凋亡途徑的失活有關(guān)。卵巢癌中多藥耐藥現(xiàn)象常見，檢測(cè)多藥耐藥相關(guān)基因MDR1、GST-π的表達(dá)對(duì)臨床預(yù)測(cè)化療藥物的敏感性有較大的應(yīng)用價(jià)值。凋亡相關(guān)基因P53(突變型)在人卵巢癌多藥耐藥細(xì)胞中高表達(dá)