電針對(duì)先天性腦損傷仔鼠腦白質(zhì)神經(jīng)髓鞘修復(fù)的影響.pdf

1、背景：
　　目前認(rèn)為，腦白質(zhì)損傷尤其是新生兒腦白質(zhì)損傷是腦癱發(fā)生的最重要的危險(xiǎn)因素。發(fā)生腦白質(zhì)損傷的患者出現(xiàn)腦癱的風(fēng)險(xiǎn)可能增加15倍，腦白質(zhì)損傷已成為導(dǎo)致新生兒傷殘的重要原因。正確認(rèn)識(shí)腦白質(zhì)損傷帶來的影響，同時(shí)深入研究并尋找修復(fù)的機(jī)制，對(duì)于降低患者的傷殘率有著重要意義。針灸對(duì)于表現(xiàn)為中樞性姿勢(shì)異常及運(yùn)動(dòng)障礙的小兒腦性癱瘓治療效果顯著。電針不同于傳統(tǒng)針灸，其是在采用普通針刺法進(jìn)針行針使患者得氣后，對(duì)相關(guān)重要穴位進(jìn)行選擇，然后接上電針

2、儀的電極并給予不同的特殊頻率的電流刺激。通過毫針作用于人體經(jīng)絡(luò)穴位，使毫針的刺激與電的生理效應(yīng)的結(jié)合以達(dá)到治療疾病的目的，這種方法在提高了毫針的治療效果的基礎(chǔ)上，進(jìn)一步擴(kuò)大了針灸的治療范圍。
　　目的：
　　本課題旨在探索將電針應(yīng)用于宮內(nèi)感染所致腦損傷仔鼠，從而探討其對(duì)宮內(nèi)感染致腦損傷仔鼠腦白質(zhì)神經(jīng)髓鞘修復(fù)的影響和機(jī)制。為尋找修復(fù)腦白質(zhì)損傷所致的新生兒非進(jìn)行性腦損傷所致的綜合征提供基礎(chǔ)研究資料，并為進(jìn)一步研究臨床上電針對(duì)小兒

3、腦損傷的治療價(jià)值提供一定的借鑒意義。
　　方法：
　　模型制備與分組:脂多糖(LPS)組孕鼠制備先天性腦損傷仔鼠模型，需在其孕第17d時(shí)連續(xù)兩天進(jìn)行腹腔注射LPS(450μg/kg.d);使用相同劑量的無菌生理鹽水進(jìn)行腹腔注射的仔鼠作為對(duì)照組。懷孕22d前即生產(chǎn)的仔鼠確定為早產(chǎn)鼠;實(shí)驗(yàn)組和對(duì)照組均去除早產(chǎn)鼠。仔鼠出生后，為判斷宮內(nèi)感染造模是否成功取胎盤做HE染色，可見大量中性粒細(xì)胞浸潤則為感染存在且宮內(nèi)感染模型成功的標(biāo)志。其

4、后依據(jù)隨機(jī)原則選用生理鹽水對(duì)照組仔鼠22只(n=22)，LPS組仔鼠40只(n=40);LPS組仔鼠再隨機(jī)分為非干預(yù)組22只(n=22)、電針組18只(n=18);在24h后對(duì)未添加干預(yù)因素的生理鹽水對(duì)照組和LPS非干預(yù)組仔鼠各隨機(jī)處死4只并取腦組織行病理學(xué)檢測(cè)。各組仔鼠均常規(guī)飼養(yǎng);電針組仔鼠常規(guī)飼喂的情況下從出生后第7d開始電針干預(yù)，納入實(shí)驗(yàn)的各組仔鼠均在實(shí)驗(yàn)的第14d、28d分別取腦白質(zhì)做病理學(xué)檢測(cè)以測(cè)量腦神經(jīng)髓鞘厚度。
　　

5、電針干預(yù):電針組仔鼠常規(guī)飼喂至出生后第7d時(shí)開始電針干預(yù)，具體方法是參照《實(shí)驗(yàn)針灸學(xué)》及王風(fēng)波等方法，選取四肢的足三里、曲池以及頭部的百會(huì)穴，所選取穴位刺入毫針后再連接電針儀，選擇頻率為5～10 Hz的連續(xù)電流進(jìn)行刺激，刺激強(qiáng)度以出現(xiàn)四肢輕微收縮、頭部輕微抖動(dòng)為度，每天干預(yù)1次，每次15分鐘，干預(yù)至28日齡。
　　電鏡標(biāo)本及圖片的制作:抽取仔鼠白質(zhì)組織塊后行常規(guī)電鏡標(biāo)本制作所需的固定和染色，包埋組織塊選用球切法(isector)，

6、以此制備腦白質(zhì)常規(guī)電鏡標(biāo)本。制作成功的組織塊包埋完成后每個(gè)均隨機(jī)切取厚度為60nm的超薄切片，制作完成的超薄切片再使用透射電子顯微鏡觀察并隨機(jī)選擇放大20000倍的5個(gè)視野進(jìn)行拍照。
　　腦神經(jīng)髓鞘厚度測(cè)量方法:參照Larsen等方法，在所攝電鏡照片上隨機(jī)疊加等距測(cè)試線，對(duì)每個(gè)待測(cè)有髓神經(jīng)纖維髓鞘斷面的內(nèi)、外邊界與測(cè)試線的交叉點(diǎn)數(shù)均進(jìn)行計(jì)數(shù)。
　　統(tǒng)計(jì)學(xué)處理:采用SPSS17.0統(tǒng)計(jì)軟件對(duì)所獲得數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)處理，P＜0.0

7、5為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　結(jié)果：
　　納入實(shí)驗(yàn)各組胎盤病理檢查結(jié)果:生理鹽水對(duì)照組孕鼠胎盤無大量中性粒細(xì)胞浸潤，LPS組孕鼠胎盤存在大量中性粒細(xì)胞浸潤。
　　各組仔鼠腦組織病理改變:生理鹽水對(duì)照組仔鼠腦白質(zhì)膠質(zhì)細(xì)胞核仁清晰，結(jié)構(gòu)完整，分布有序，LPS組仔鼠腦白質(zhì)膠質(zhì)細(xì)胞大量聚集，同時(shí)存在明顯的血管擴(kuò)張、出血等。
　　3組仔鼠腦神經(jīng)髓鞘厚度體視學(xué)檢測(cè)結(jié)果:第14天LPS非干預(yù)組仔鼠腦神經(jīng)髓鞘平均厚度為65.445

8、7±6.9376，LPS電針組仔鼠腦白質(zhì)神經(jīng)髓鞘厚度平均值為88.5768±2.6786，生理鹽水對(duì)照組仔鼠腦白質(zhì)神經(jīng)髓鞘厚度平均值為109.7667±9.7985，LPS組所測(cè)得的神經(jīng)髓鞘厚度均明顯低于生理鹽水對(duì)照組所測(cè)得的神經(jīng)髓鞘厚度，組間差異顯著(P＜0.01);第28天LPS非干預(yù)組仔鼠腦白質(zhì)神經(jīng)髓鞘平均厚度為88.4465±5.3365，LPS電針組仔鼠腦白質(zhì)神經(jīng)髓鞘厚度平均值為110.5546±4.6673，均明顯低于生理鹽

9、水對(duì)照組仔鼠腦白質(zhì)神經(jīng)髓鞘所測(cè)得的平均厚度126.5667±4.5768，組間差異顯著(P＜0.01);第14天和第28天LPS電針組仔鼠髓鞘厚度均低于生理鹽水對(duì)照組，表明LPS所致的宮內(nèi)感染可引起仔鼠髓鞘厚度明顯降低;LPS電針組仔鼠髓鞘厚度平均值高于LPS非干預(yù)組(P＜0.01)表明實(shí)施電針干預(yù)措施可以有效促進(jìn)仔鼠髓鞘厚度的增長;各組第14d與28d組內(nèi)比較，均有顯著差異(P＜0.01)。
　　結(jié)論：
　　宮內(nèi)感染所致仔

10、鼠腦白質(zhì)髓鞘受損致使髓鞘厚度平均值明顯降低，造成這種病理改變的機(jī)制可能與宮內(nèi)感染后引起炎癥反應(yīng)發(fā)生，而炎癥反應(yīng)時(shí)出現(xiàn)自由基毒性明顯增強(qiáng)以及大量釋放炎癥因子，從而造成了神經(jīng)纖維軸突斷裂和少突膠質(zhì)細(xì)胞的損傷等因素有關(guān)。然而電針干預(yù)顯著提高先天性腦損傷所致仔鼠腦神經(jīng)髓鞘厚度增加，可有效促進(jìn)腦損傷仔鼠腦白質(zhì)的神經(jīng)髓鞘進(jìn)行修復(fù)。因此，進(jìn)行早期而積極的電針干預(yù)，可提高腦白質(zhì)神經(jīng)髓鞘平均厚度，有利于對(duì)因?qū)m內(nèi)感染誘發(fā)的一系列病理變化而損傷的腦白質(zhì)神經(jīng)髓