玻璃化低溫保存肌腱細胞與PDMS材料復合物的實驗研究.pdf

1、目的:建立一種研究工程化人工肌腱低溫保存的實驗模型，尋找一種較好的玻璃化低溫保存劑配方，建立一套相應的操作流程，以期工程化人工肌腱在低溫保存后獲得較高的細胞存活率，以滿足組織工程肌腱產(chǎn)業(yè)化需要。 材料和方法:從sD大鼠乳鼠尾腱中分離出原代肌腱細胞，行Ⅰ,Ⅲ型膠原免疫細胞化學鑒定并擴增備用。制備表面微溝槽硅膠膜和3D硅膠泡沫，經(jīng)Ⅰ型膠原裱襯滅菌后接種肌腱細胞，靜態(tài)培養(yǎng)9天。將肌腱細胞與PDMS材料復合物在0℃連續(xù)滴注導入VS55玻

2、璃化保存液和21％DMSO凍存液，VS55組直接投入液氮中，21％DMSO組先以1℃/min梯度降溫至-60℃再直接投入液氮，在液氮溫度保存24h以上，37℃水浴快速復溫后，0℃連續(xù)滴注洗脫低溫保存劑，恢復培養(yǎng)1h后，行掃描電鏡、熒光染色觀察細胞粘附和形態(tài)。行流式細胞檢測確定細胞的存活率。 結(jié)果:sD大鼠乳鼠尾腱源細胞Ⅰ型膠原免疫細胞化學染色呈陽性，Ⅲ型膠原細胞免疫化學染色陰性，符合肌腱細胞生物學特性。肌腱細胞在裱襯Ⅰ型膠原的微

3、溝槽硅膠膜表面可定向定形生長，可作為研究細胞粘附形態(tài)與低溫凍存關系的實驗模型。VS55玻璃化保存液保存鼠尾肌腱細胞與裱襯I型膠原的3D硅膠泡沫材料復合物，肌腱細胞復蘇后平均存活率(平均64.9％)低于21％DMSO凍存液(平均76.2％)。 結(jié)論:玻璃化低溫保存需要復雜的凍存劑導入和洗脫流程。由于缺乏深低溫段的程序化溫度控制設備，本實驗的結(jié)果不太理想。玻璃化保存需要建立標準的操作程序，最好由機器程控完成。21％DMSO僅需要簡單