P物質(zhì)及其介導(dǎo)的神經(jīng)源性炎癥在小鼠免疫性肝炎中的作用研究.pdf

1、目的：通過尾靜脈注射刀豆蛋白A建立小鼠免疫性肝炎模型，觀察肝勻漿中P物質(zhì)(substance P,SP)含量及其受體神經(jīng)激肽-1受體(Neurokinin-lreceptor,NK-1R)在肝組織中的表達(dá)，以揭示SP介導(dǎo)的神經(jīng)源性炎癥在肝炎的發(fā)生、發(fā)展中的可能作用；同時(shí)從血清學(xué)、組織學(xué)和細(xì)胞因子表達(dá)方面研究NK-1R受體阻滯劑L-703，606對(duì)小鼠免疫性肝炎模型的干預(yù)作用，進(jìn)一步證實(shí)肝炎的起始和擴(kuò)大中的神經(jīng)內(nèi)分泌機(jī)制，并為臨床上各型肝

2、炎的治療提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。 方法：60只雌性小鼠隨機(jī)平分為三組：①生理鹽水對(duì)照組：予尾靜脈注射生理鹽水0.2ml；②刀豆球蛋白A(Con A)免疫性肝炎模型組：尾靜脈注射ConA(20 mg/kg)；③L-703，606干預(yù)組：在接受等量ConA注射前30分鐘尾靜脈注射L-703，606(10 mg/kg)。給藥6小時(shí)后，水合氯醛麻醉小鼠，眼眶取血，然后處死所有小鼠并取出肝臟，分別應(yīng)用酶聯(lián)免疫吸附(ELISA)法與RT-PCR法測定

3、對(duì)照組和模型組肝臟組織中P物質(zhì)含量及其受體NK-1R mRNA的相對(duì)定量表達(dá)；同時(shí)分別檢測各組血清中ALT、AST水平，HE染色觀察肝臟病理變化，實(shí)時(shí)熒光定量PCR測定肝臟組織中TNF-a和IFNI-γmRNA的表達(dá)情況。 結(jié)果：(1)模型組肝組織勻漿中SP含量顯著高于對(duì)照組：而且模型組NK-1R mRNA的表達(dá)顯著上調(diào)：(2)病理觀察：模型組可見肝細(xì)胞索破壞，肝竇稍增寬，內(nèi)有大量瘀血，肝細(xì)胞彌漫性腫脹，核固縮、溶解甚至消失，點(diǎn)

4、、灶狀及片狀壞死多見，匯管區(qū)及中央靜脈肝竇內(nèi)可見中性粒細(xì)胞和淋巴細(xì)胞浸潤；而干預(yù)組上述肝組織病理改變明顯減輕，肝細(xì)胞腫脹壞死及淋巴細(xì)胞浸潤也較模型組明顯改善；(3)模型組與干預(yù)組血清AST、ALT水平均大幅升高(P<0.01)，但與模型組相比，干預(yù)組ALT和AST明顯下降，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；(4)干預(yù)組肝組織TNF-a和IFN-γmRNA表達(dá)水平較模型組顯著下調(diào)(P<0.05)。 結(jié)論： 1.本實(shí)驗(yàn)成功

5、建立了小鼠免疫性肝炎模型，組織病理顯示模型組肝臟點(diǎn)、灶狀及片狀壞死多見，匯管區(qū)及中央靜脈肝竇內(nèi)可見中性粒細(xì)胞和淋巴細(xì)胞浸潤。 2.模型組肝組織勻漿SP含量及其受體NK-1R mRNA的表達(dá)顯著高于對(duì)照組，證明SP介導(dǎo)的神經(jīng)源性炎癥在肝炎的發(fā)生、發(fā)展中可能發(fā)揮重要的作用。 3.NK-1R受體阻滯劑L-703,606干預(yù)，可使血清AST、ALT水平、肝臟組織病理變化及肝組織TNF-a和IFN-γmRNA表達(dá)水平明顯下降，證明