自身免疫性肝炎小鼠腹腔巨噬細(xì)胞功能改變及其在治療中的作用.pdf

1、目的:研究自身免疫性肝炎（autoimmunehepatitis，AIH）模型小鼠腹腔巨噬細(xì)胞表面抗原遞呈分子MHCII、CD40表達(dá)的變化及巨噬細(xì)胞吞噬功能的改變，以及氫化可的松琥珀酸鈉和復(fù)方甘草酸苷對(duì)AIH模型小鼠腹腔巨噬細(xì)胞吞噬功能的影響并研究其意義，從而探討AIH的發(fā)病機(jī)制及復(fù)方甘草酸苷對(duì)于AIH治療作用的免疫學(xué)機(jī)制，為AIH的治療以及復(fù)方甘草酸苷的應(yīng)用開辟新的前景。
　　 方法:(1)造模:4-6周齡的雌性C57BL/

2、6小鼠，以同種系S-100肝抗原與弗氏完全佐劑充分乳化后分別于第一天及第7天兩次予小鼠腹腔注射建立AIH的動(dòng)物模型，對(duì)照組采用同劑量的生理鹽水與弗氏佐劑的混合液，并于免疫后第4周末處死小鼠;(2)提取、分離、培養(yǎng)小鼠腹腔巨噬細(xì)胞:提取后置培養(yǎng)箱培養(yǎng)后，用不含小牛血清的RPMI-1640培養(yǎng)液漂洗，然后加含小牛血清的RPMI-1640培養(yǎng)液在培養(yǎng)箱中繼續(xù)培養(yǎng)以備用;(3)配制藥物及體外細(xì)胞加藥:含小牛血清的RPMI-1640培養(yǎng)液分別將氫

3、化可的松琥珀酸鈉和復(fù)方甘草酸苷濃度分別調(diào)配至1mg/ml，對(duì)照組僅加入培養(yǎng)液，培養(yǎng)箱中培養(yǎng)30min，然后加入異硫氰酸熒光素(fluoresceinisothiocyanate，F(xiàn)ITC)標(biāo)記的大腸桿菌(escherichiacoli，E.coli)共孵育;(4)巨噬細(xì)胞表面抗原遞呈分子測(cè)定:加入不含F(xiàn)ITC標(biāo)記E.coli共孵育，用流式細(xì)胞儀測(cè)定抗原呈遞分子MHCII及其協(xié)同共刺激分子CD40在正常小鼠及AIH模型小鼠巨噬細(xì)胞表面的表

4、達(dá)情況，從而判斷巨噬細(xì)胞的抗原遞呈能力;(5)AIH小鼠腹腔巨噬細(xì)胞吞噬功能的測(cè)定:小鼠腹腔巨噬細(xì)胞與FITC標(biāo)記的E.coli共孵育1小時(shí)，用熒光顯微鏡檢測(cè)吞噬細(xì)菌的細(xì)胞數(shù)量和吞噬細(xì)菌的總數(shù)，并用流式細(xì)胞儀檢測(cè)驗(yàn)證吞噬細(xì)菌的細(xì)胞數(shù)量，分析AIH加藥組與未加藥組和對(duì)照組巨噬細(xì)胞吞噬功能的差異。
　　 結(jié)果:(1)流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)AIH模型小鼠腹腔巨噬細(xì)胞表面抗原提呈分子MHCII表達(dá)較對(duì)照組明顯減低，（對(duì)照組VSAIH模型組為:0

5、.762±0.049vs.0.362±0.035，P=0.000），兩組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義;AIH模型小鼠腹腔巨噬細(xì)胞表面抗原提呈分子CD40的表達(dá)也顯著低于對(duì)照組，（對(duì)照組VS.AIH模型組為:0.885±0.025vs.0.409±0.018，P=0.000），兩組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義;(2)熒光顯微鏡檢觀察AIH模型小鼠腹腔巨噬細(xì)胞吞噬率及吞噬指數(shù)顯著低于對(duì)照組（吞噬率:0.208±0.046vs.0.465±0.081，P=0

6、.000;吞噬指數(shù):0.390±0.105vs.0.848±0.091，P=0.000）;氫化可的松琥珀酸鈉能提高AIH模型小鼠腹腔巨噬細(xì)胞吞噬率及吞噬指數(shù)（吞噬率:0.208±0.046vs.0.428±0.073，吞噬指數(shù):0.390±0.105vs.0.798±0.065），復(fù)方甘草酸苷也使AIH腹腔巨噬細(xì)胞吞噬率及吞噬指數(shù)明顯升高（吞噬率:0.178±0.039vs.0.375±0.094，吞噬指數(shù):0.353±0.078vs.

7、0.702±0.084），與AIH小鼠未加藥腹腔巨噬細(xì)胞吞噬率及吞噬指數(shù)比較均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異;(3)利用流式細(xì)胞儀驗(yàn)證對(duì)照組小鼠、AIH小鼠腹腔巨噬細(xì)胞未加藥組及加氫化可的松琥珀酸鈉組、復(fù)方甘草酸苷組的吞噬率（分別為:0.368±0.067，0.184±0.020，0.351±0.047，0.342±0.020），結(jié)果進(jìn)一步驗(yàn)證了熒光顯微鏡實(shí)驗(yàn)結(jié)果，即AIH模型小鼠腹腔巨噬細(xì)胞吞噬率顯著降低，氫化可的松琥珀酸鈉和復(fù)方甘草酸苷均能提高AI

8、H模型小鼠腹腔巨噬細(xì)胞吞噬率。
　　 結(jié)論:①AIH小鼠腹腔巨噬細(xì)胞表面抗原遞呈分子MHCII、CD40表達(dá)減低，巨噬細(xì)胞抗原遞呈功能減低，可能是AIH發(fā)病的重要一環(huán)。②AIH小鼠腹腔巨噬細(xì)胞吞噬率及吞噬指數(shù)也顯著低于對(duì)照組，氫化可的松琥珀酸鈉處理后的AIH小鼠腹腔巨噬細(xì)胞的吞噬率及吞噬指數(shù)顯著提高，對(duì)研究AIH的發(fā)病機(jī)制具有重要意義。③復(fù)方甘草酸苷也能顯著提高AIH小鼠腹腔巨噬細(xì)胞的吞噬率及吞噬指數(shù)，其可能為AIH的治療提供一