骨髓間充質(zhì)干細胞治療小鼠自身免疫性肝炎的實驗研究.pdf

1、目的：
　　自身免疫性肝炎(autoimmunehepatitis，AIH)的發(fā)病與誘發(fā)因素、自身抗原應(yīng)答、遺傳易感性和免疫調(diào)節(jié)網(wǎng)絡(luò)等相關(guān)。單用糖皮質(zhì)激素或聯(lián)合免疫抑制劑存在疾病完全緩解率低，需要長期服藥和類腎上腺皮質(zhì)功能亢進綜合癥等多種副作用。AIH最終可進展為肝硬化并需要肝移植，尋找更安全、有效和經(jīng)濟的治療方法將有深遠的意義。對間充質(zhì)干細胞(mesenchymalstemcells，MSCs)的理化特性和實際應(yīng)用的研究為AIH

2、的治療提供了新的方向。MSCs具有免疫抑制、多向分化和抗纖維化等多方面的作用。本研究探討MSCs對AIH小鼠模型的治療作用及其可能的機制，并觀察MSCs預(yù)移植對AIH小鼠成模的影響。
　　材料和方法：
　　1.AIH小鼠動物模型的建立。分次腹腔注射同種異體小鼠肝s-100抗原與弗氏完全佐劑乳化液，首次注射后第4周予以鑒定模型是否建立。
　　2.MSCs移植對AIH小鼠模型療效觀察。AIH小鼠隨機分為三組：MSCs移植治

3、療組(組1)，給予1×106/只MSCs單次尾靜脈注射；地塞米松治療組(組2)，給予0.25mg/g·周DXM分次腹腔注射；空白對照組(組3)，給予0.05ml/只·周PBS腹腔注射；實驗第5周和第9周取肝臟制作病理切片，取血清測谷丙轉(zhuǎn)氨酶(glutamic-pyruvictransaminase，ALT)水平。
　　3.觀察MSCs對AIH成模的影響。分為兩組：首日MSCs移植，隔日給予造模處理(組Ⅰ)；首日給予磷酸鹽緩沖液(p

4、hosphatebufferedsolution，PBS)注射，隔日造模處理(組Ⅱ)。首次注射后4周取肝臟做病理檢查，取血清標本測ALT。
　　4.體外MSCs上清液對脾淋巴細胞增殖的影響：凝膠層析技術(shù)分離小鼠肝s-100抗原第1峰(s-100-1)，用小鼠淋巴細胞分離液分離出正常小鼠的脾臟淋巴細胞，進行分組：刀豆蛋白A培養(yǎng)組(組A)；刀豆蛋白A聯(lián)合MSCs上清液培養(yǎng)組(組B)；s-100-1培養(yǎng)組(組C)；s-100-1聯(lián)合MS

5、Cs上清液培養(yǎng)組(組D)。對各組進行淋巴細胞增殖抑制實驗，后測各組吸光度(opticaldensity，OD)值。
　　結(jié)果：
　　1.AIH小鼠模型的建立：AIH小鼠肝臟平均炎癥評分為2.67±0.516，Knodell評分5.50±1.975，血清學(xué)AIL水平為122.00±15.476。
　　2.MSCs移植于AIH小鼠的療效觀察：
　　2.1造模后(第4周)小鼠血清ALT為122.00±15.476U/L

6、。第5周，組1、組2和組3小鼠血清ALT分別為：101.43±9.144U/L、115.00±10.315U/L和118.33±15.161U/L。三組間差異有統(tǒng)計學(xué)(P<0.05)，組1和組2兩組間比較，差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)。第9周，組1、組2和組3小鼠血清ALT分別為：84.00±6.557U/L、98.83±15.767U/L和107.50±11.777U/L，三組間差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)，組1和組2兩組間比

7、較，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。
　　2.2造模后(第4周)小鼠肝臟Knodell評分為5.50±1.975。第5周，組1、組2和組3小鼠肝臟Knodell評分分別為：3.00±1.528、3.33±1.366和4.67±1.862，三組間差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)，組1和組2差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)。第9周，組1、組2和組3小鼠肝臟Knodell評分分別為：2.00±1.291、2.67±0.516和4.33

8、±2.066，三組間差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)，組1和組2差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)。
　　3.MSCs預(yù)移植對小鼠AIH模型成模的研究：
　　3.1組Ⅰ和組Ⅱ小鼠的ALT水平分別為：52.17±15.741U/L和122.±15.476U/L，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。
　　3.2組Ⅰ和組Ⅱ小鼠的肝臟Knodell評分分別為：3.33±0.816和5.50±1.975，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.0

9、5)。
　　4.體外MSCs上清液對脾淋巴細胞增殖的影響：
　　組A的OD值為0.267±0.167，組B的OD值為0.217±0.128，兩組間差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。組C的OD值為0.165±0.187，組D的OD值為0.082±0.051，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。
　　結(jié)論：
　　1.同種異體肝抗原與弗氏完全佐劑乳化液注射方法可以復(fù)制出AIH小鼠模型。
　　2.MSCs移植可以減低