葉酸介導(dǎo)的牛血清白蛋白氟尿嘧啶前體藥物的合成及靶向作用的研究.pdf

1、目的：合成葉酸介導(dǎo)的牛血清白蛋白5-氟尿嘧啶偶聯(lián)物(F-BSA-5-FU)，并進(jìn)行各步反應(yīng)純化、分離及合成條件的優(yōu)化；制備葉酸介導(dǎo)的牛血清白蛋白5-氟尿嘧啶偶聯(lián)物納米粒(F-BSANP-5-FU)及牛血清白蛋白5-氟尿嘧啶偶聯(lián)物納米粒(BSANP-5-FU)，通過制備包裹鈣黃綠素納米粒對(duì)偶聯(lián)物體內(nèi)腫瘤靶向性進(jìn)行評(píng)價(jià)，并對(duì)偶聯(lián)物納米粒藥效學(xué)進(jìn)行評(píng)價(jià)。 方法：運(yùn)用正交實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)葉酸偶聯(lián)牛血清白蛋白的合成實(shí)驗(yàn)，以葉酸用量、EDC與葉酸摩

2、爾比、反應(yīng)時(shí)間三因素為考察對(duì)象，以葉酸與牛血清白蛋白的偶聯(lián)比值為評(píng)價(jià)指標(biāo)，從中篩選出最優(yōu)的合成條件。以產(chǎn)率為指標(biāo)進(jìn)行5-氟尿嘧啶-1-基乙酸（5-FUA）及其活性酯的合成，運(yùn)用正交設(shè)計(jì)5-FUA活性酯的合成實(shí)驗(yàn)，篩選最佳合成條件，計(jì)算產(chǎn)率，測(cè)定產(chǎn)物熔點(diǎn)。通過單因素考察5-FUA活性酯與BSA、F-BSA的偶聯(lián)條件，優(yōu)化最佳合成條件。分別運(yùn)用紫外、紅外、差熱分析、MALDI-TOF-MS監(jiān)測(cè)上述合成產(chǎn)物，同時(shí)通過化學(xué)分析法及MALDI-T

3、OF-MS計(jì)算F-BSA-5-FU、BSA-5-FU中藥物密度，即前體藥物中偶聯(lián)5-FU的個(gè)數(shù)。采用去溶劑-化學(xué)交聯(lián)法制備F-BSANP-5-FU、BSANP-5-FU及包裹有鈣黃綠素的納米粒，以藥物濃度、溶液pH、交聯(lián)劑的用量、交聯(lián)時(shí)間為考察對(duì)象，以納米粒平均粒徑及多分散系數(shù)為考察指標(biāo)，優(yōu)化納米粒的制備條件，通過透射電鏡、激光粒度分布儀等對(duì)納米粒進(jìn)行表征；以接種7～10d的肝癌(H22)實(shí)體瘤小鼠為模型，腹腔注射包裹有鈣黃綠素的納米粒

4、，采用熒光分光光度法評(píng)價(jià)納米粒的體內(nèi)腫瘤靶向性情況；通過腹腔給藥評(píng)價(jià)F-BSANP-5-FU、BSANP-5-FU抑制腫瘤情況，并計(jì)算抑瘤率、脾指數(shù)、胸腺指數(shù)。將原始數(shù)據(jù)輸入微機(jī)，利用SPSS11.5進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。抑瘤率(％)=(對(duì)照組平均瘤重－給藥組平均瘤重)／對(duì)照組平均瘤重×100％；脾和胸腺指數(shù)計(jì)算方法如下：脾或胸腺指數(shù)=脾或胸腺重量(mg)／鼠體重(g)，對(duì)各組的腫瘤進(jìn)行病理切片，觀察腫瘤抑制情況。 結(jié)果：運(yùn)用最優(yōu)化的合

5、成條件合成了偶聯(lián)比約為4的葉酸牛血清白蛋白，即一個(gè)牛血清白蛋白偶聯(lián)4個(gè)葉酸；5-FU mp:283℃～284℃，5-FUA mp:276℃～278℃,產(chǎn)率為81.37％；5-FUA活性酯mp:255℃～257℃，產(chǎn)率為83.98％；紫外、紅外、差熱分析、MALDI-TOF-MS結(jié)果顯示已成功合成上述化合物；通過化學(xué)分析法及MALDI-TOF-MS計(jì)算F-BSA-5-FU、BSA-5-FU中偶聯(lián)5-FU的個(gè)數(shù)分別為11、13；成功制備粒徑

6、均小于200nm的納米粒，所得納米粒粒徑均一，形態(tài)完整；體內(nèi)腫瘤靶向性實(shí)驗(yàn)顯示：腹腔注射同等劑量不同組別的含鈣黃綠素藥物在體內(nèi)的蓄積不同(P<0.05)；包裹有鈣黃綠素的BSANP-5-FU組(A組)在腫瘤組織中的鈣黃綠素量在2.0h達(dá)到峰值,而后下降，包裹有鈣黃綠素的F-BSANP-5-FU組（B組）在腫瘤組織中的鈣黃綠素濃度在0.5h就達(dá)到峰值，而后急劇下降，肝、腎組織中的鈣黃綠素量低于腫瘤組織，卻高于心、脾、肺組織，B組峰值顯著高

7、于A組；動(dòng)物水平的藥效學(xué)實(shí)驗(yàn)顯示：腹腔注射F-BSANP-5-FU高劑量組的荷瘤小鼠腫瘤生長(zhǎng)最為緩慢，抑瘤率最高，達(dá)到47.19％，F(xiàn)-BSANP-5-FU的抑瘤率顯著高于BSANP-5-FU，在加入1 mmol/L外源性葉酸后，F(xiàn)-BSANP-5-FU的抑瘤率明顯降低。5-FU陽(yáng)性對(duì)照組的抑瘤率高于BSANP-5-FU組。 結(jié)論：采用溫和條件下合成的F-BSA-5-FU，其納米粒具有腫瘤靶向性，該靶向性是通過葉酸介導(dǎo)的，并且對(duì)