硼替佐米增加耐藥白血病細胞株K562-DNR對化療藥物敏感性的研究.pdf

1、白血病細胞對化療藥物的不敏感或耐藥是導(dǎo)致化療失敗及預(yù)后不良的重要原因，因此如何逆轉(zhuǎn)耐藥性成為眾多研究者研究的熱門話題。硼替佐米(bortezomib)是新型蛋白酶體抑制劑類藥物，細胞實驗發(fā)現(xiàn)其對多種腫瘤細胞有誘導(dǎo)調(diào)亡的作用，目前臨床被應(yīng)用于治療復(fù)發(fā)及難治性多發(fā)性骨髓瘤。我們應(yīng)用硼替佐米與柔紅霉素(DNR)及表柔比星聯(lián)合作用，觀察其對耐藥白血病細胞株K562/DNR的影響，探討硼替佐米的逆轉(zhuǎn)耐藥作用。 目的： 觀察蛋白酶體

2、抑制劑硼替佐米與常規(guī)化療藥物聯(lián)合作用是否增加耐藥白血病細胞株：K562/DNR對化療藥物的敏感性。 方法： 1、細胞培養(yǎng)：K562/S,K562/DNR 細胞使用含有12％胎牛血清，100 U/ml的青霉素和100ug/ml鏈霉素的RPMI-1640培養(yǎng)液，在37℃、5％CO2、飽和濕度條件下培養(yǎng)。細胞經(jīng)多次傳代后至指數(shù)生長期進行實驗。 2、MTT法測定硼替佐米的細胞毒性：不同濃度的硼替佐米作用于K562/DNR

3、細胞株，藥物對細胞生長抑制率％=1-實驗孔A值/對照孔A值×100％，根據(jù)線性回歸方程求得10％的細胞生長受到抑制所需藥物濃度IC10。選取低于IC10的一個濃度，作為硼替佐米試驗濃度，測定其與化療藥物聯(lián)合應(yīng)用對K562/DNR細胞生長的抑制作用。 3、MTT法測定硼替佐米逆轉(zhuǎn)耐藥倍數(shù)：實驗分組：1組K562/DNR+表柔比星；2 組 K562/DNR+表柔比星+硼替佐米；3 組 K562/DNR十柔紅霉素；4組K562/DNR

4、+柔紅霉素+硼替佐米。取每組藥液以10 ul/孔置于96孔酶標板中，檢測每孔的吸收度A值。逆轉(zhuǎn)倍數(shù)=耐藥株IC50、加逆轉(zhuǎn)劑后IC50。 4、流式細胞儀檢測細胞調(diào)亡。 結(jié)果： MTT法測得表柔比星單獨作用于K562/DNR細胞株的IC50為417.0ug/ml，聯(lián)合硼替佐米后IC50為210.4ug/ml，逆轉(zhuǎn)倍數(shù)為1.98倍；柔紅霉素單獨作用于K562/DNR細胞株的IC50為457.7ug/ml，聯(lián)合硼替佐米