靶向siRNA沉默Ets2基因對人急性單核細胞白血病細胞株SHI-1化療敏感性影響的實驗研究.pdf

1、【目的】研究靶向小干擾RNA(siRNA）對人單核細胞白血病細胞株SHI-1中Ets2基因表達的沉默作用及其對SHI-1 細胞化療敏感性的影響及Ets2基因在白血病患者中的表達情況。
　　 【方法】1.應用逆轉錄-聚合酶鏈式反應（RT-PCR）技術檢測28例初治白血病患者骨髓標本和SHI-1 細胞中Ets2的表達情況，取5例體檢為正常人外周血標本做為對照。2.設計、篩選和體外化學合成3 對針對Ets2基因mRNA的siRNA(E

2、ts2 siRNA-1，Ets2siRNA-2和Ets2 siRNA-3），用電穿孔方法轉染SHI-1 細胞，以未轉染siRNA的細胞及轉染非特異性的siRNA 細胞作對照；同時轉染帶有綠色熒光蛋白（FAM）的載體作為陽性對照，流式細胞術檢測其綠色熒光以確定轉染效率；實時熒光定量PCR（real-time PCR）法檢測Ets2 mRNA的抑制效應；FITC 標記的膜聯(lián)蛋白V/碘化丙錠（Annexin V-FITC/PI）雙染色流式細胞

3、術檢測靶向siRNA 沉默Ets2基因后細胞的凋亡和對VP-16 誘導SHI-1 細胞凋亡的影響。
　　 【結果】1.SHI-1 細胞中Ets2基因高表達；28例初治白血病患者中,21例患者骨髓中擴增出Ets2基因，表達率明顯高于對照組(p=0.033)。ANLL 患者Ets2表達率為73.68％，ALL 為60％，健康對照組表達率為10％。未發(fā)現(xiàn)Ets2表達與性別、年齡、ANLL分型、外周血白細胞、血紅蛋白和血小板水平相關。2

4、.Ets2 siRNA-3 可顯著抑制SHI-1 細胞Ets2 mRNA表達，這種抑制作用在沉默48h后最明顯，mRNA表達水平下降約30％。Ets2 siRNA-1 可使Ets2 mRNA表達程度下降約10％而Ets2 siRNA-2沉默效應不明顯。3.Ets2基因沉默后細胞凋亡率可在一定程度上增加（P=0.0001），且對VP-16 誘導SHI-1 細胞凋亡有促進作用（P=0.004）。
　　 【結論】Ets2 轉錄因子在白