中醫(yī)“毒”邪理論探討及從“毒”論治非酒精性脂肪肝實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、目的：隨著國(guó)家經(jīng)濟(jì)條件的改善，人民飲食習(xí)慣發(fā)生了很大變化，非酒精性脂肪性肝(nonalcoholic fatty liver disease,NAFLD)發(fā)病逐漸增多。其病理機(jī)制比較復(fù)雜，迄今尚未完全闡明。前期臨床療效觀察表明排毒降脂合劑對(duì)NASH患者具有明顯的降低血脂和改善肝功能的作用，在此基礎(chǔ)上，本實(shí)驗(yàn)通過觀察排毒降脂合劑對(duì)非酒精性脂肪肝模型大鼠血清谷丙轉(zhuǎn)氨酶(ALT)、谷草轉(zhuǎn)氨酶(AST)、膽固醇(totalcholesterol

2、,TC)、甘油三脂(triglyceride,TG)、低密度脂蛋白(low densitylipoprotein,LDL)、高密度脂蛋白(high density lipoprotein,HDL)、丙二醛(malondialdehyde，MDA)與超氧化物歧化酶(superoxide dismutase，SOD)的影響和對(duì)肝組織腫瘤壞死因子(the tumor necrosis factor-α，TNF-α)的表達(dá)的影響等方面來探討排毒

3、降脂合劑對(duì)非酒精性脂肪肝的保護(hù)作用及其可能機(jī)制，為臨床使用提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。 方法： 同批成年雄性Wisater大鼠60只，體重190±20g。普通飼料正常喂養(yǎng)一周后，隨機(jī)分為6組，每組10只。A組：正常對(duì)照組；B組：空白模型組；C1組：排毒降脂合劑大劑防治量組；C2組：排毒降脂合劑中防治量組；C3組：排毒降脂合劑小防治量組；D組：西藥對(duì)照組(脂必妥防治組)，以上6組大鼠統(tǒng)一標(biāo)號(hào)，分籠飼養(yǎng)。參考祁培宏等報(bào)道的方法配成高脂飼料

4、(5％乳清酸、10％膽固醇、20％豬油、1％蛋黃粉，1％丙基硫氧嘧啶)，除正常組常規(guī)飼養(yǎng)外，其余5組同期造模，每天給予高脂飼料喂養(yǎng)，24h飲水，攝食不限，持續(xù)8w復(fù)制大鼠NASH模型。在高脂飼料喂養(yǎng)的同時(shí)，治療組大鼠從造模8w末開始，每日給予排毒降脂合劑，按臨床成人等效量進(jìn)行換算，稀釋成1:2:4低、中、高不同濃度，C1、C2、C3組分別按低、中、高濃度排毒降脂合劑1ml/100g.d灌胃，每日1次；D組用脂必妥混懸液0.09g/1ml

5、/100g.d灌胃，每日1次；正常組和模型組均以同體積的生理鹽水1ml/100g.d灌胃，每日一次。維持4W(共12W)。以上6組大鼠于12w末全部殺檢，分離血清及留取肝組織。于模型建立及給藥期間觀察記錄動(dòng)物體重、食欲、行為、狀態(tài)、毛發(fā)及死亡情況，計(jì)算肝指數(shù)，檢測(cè)血清總膽固醇(TC)、甘油三酯(TG)、高密度脂蛋白(HDL-C)、低密度脂蛋白(LDL-C)、超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)水平。肝組織腫瘤壞死因子-α(TNF-

6、α)的表達(dá)。組間比較用兩樣本均數(shù)的t檢驗(yàn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，各指標(biāo)之間的相關(guān)性采用兩因素的相關(guān)分析，計(jì)量資料數(shù)據(jù)均以x±s形式表示。 結(jié)果： 1．根據(jù)模型組大鼠肝組織病理及肝功能狀態(tài)，成功復(fù)制大鼠NASH動(dòng)物模型。與空白模型組相比，排毒降脂合劑大劑量組大鼠肝指數(shù)顯著降低(P<0.01)，與模型組相比，排毒降脂合劑大、中劑量組能降低血清TC、TG、LDL-C、ALT和AST(P<0.01，P<0.05)，升高血清HDL-C(I)

7、<0.01，P<0.05)，以高劑量組效果最顯著。 2．與空白模型組相比，排毒降脂合劑大劑量組顯著提高對(duì)NASH大鼠肝組織SOD水平(P<0.01)，降低MDA含量(P<0.01)，優(yōu)于排毒降脂合劑中、小劑量組(P<0.05)和脂必妥片對(duì)照組(P<0.01)。 3．與空白模型組相比，排毒降脂合劑組大鼠肝組織TNF-α的蛋白表達(dá)顯著降低(P<0.01)，明顯優(yōu)于脂必妥片對(duì)照組(P<0.01)。 4．鏡下所見，正常組

8、大鼠肝組織結(jié)構(gòu)完整、清晰，肝小葉結(jié)構(gòu)正常，中央靜脈大而壁簿，肝細(xì)胞排列成肝索，在中央靜脈周圍呈放射狀分布，細(xì)胞呈多邊形。模型組大鼠所有標(biāo)本的肝組織切片均可見彌漫性肝細(xì)胞脂肪變性，主要為小泡性脂肪變性，也有部分大泡性脂肪變性，同時(shí)肝小葉內(nèi)和匯管區(qū)有單核細(xì)胞為主的炎性細(xì)胞浸潤(rùn)，以小葉內(nèi)炎癥為主，部分大鼠肝組織小葉內(nèi)壞死灶融合成片大鼠肝細(xì)胞中度細(xì)胞水腫。排毒降脂合劑大、中劑量組肝小葉和肝竇結(jié)構(gòu)清晰，細(xì)胞排列整齊，僅有少數(shù)肝細(xì)胞內(nèi)有脂滴空泡，細(xì)

9、胞核結(jié)構(gòu)清晰，核膜、核仁、核質(zhì)著色正常。排毒降脂合劑小劑量組和脂必妥組小鼠肝細(xì)胞形態(tài)不規(guī)則，核模凹陷，胞質(zhì)內(nèi)脂滴明顯增多，染色體輕度腫脹。 結(jié)論： 1．對(duì)血脂的影響：排毒降脂合劑降低血清TC、TG、LDL脂質(zhì)，升高HDL從而減少FFA的肝臟毒性和TG積聚。 2．對(duì)氧化及抗氧化狀態(tài)的影響：排毒降脂合劑提高肝組織抗氧化能力，緩解氧化應(yīng)激，減少脂質(zhì)過氧化。 3．對(duì)TNF-α蛋白表達(dá)的影響：排毒降脂合劑降低TNF