TLRs基因多態(tài)與葡萄膜炎遺傳易感性研究.pdf

1、目的:在以往的研究中發(fā)現(xiàn)Toll樣受體在重多自身免疫性疾病（例如:風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、系統(tǒng)性硬化病、Behcet病、系統(tǒng)性紅斑狼瘡等）中發(fā)揮著相當(dāng)重要的作用。Toll樣受體同RIG樣受體及Nod樣受體都是模式識別受體家族中的成員，它們都是構(gòu)成天然免疫的主要參與者。目前已發(fā)現(xiàn)13種哺乳類動(dòng)物的Toll樣受體，而人的Toll樣受體家族成員有10種(TLR1-10)。在這10種Toll樣受體家族成員中，已發(fā)現(xiàn)TLR2，4，7和9的基因多態(tài)和自身免疫

2、性疾病相關(guān)，而TLR8的基因多態(tài)與獲得性免疫缺陷病(AIDS)相關(guān)聯(lián)。鑒于上述事實(shí)，我們認(rèn)為Toll樣受體在多種自身免疫性疾病的發(fā)生過程中有著至關(guān)重要的作用，因此，在本實(shí)驗(yàn)中我們將研究Toll樣受體的基因多態(tài)是否與中國漢族的葡萄膜炎疾?。ò˙ehcet病、Vogt-小柳原田綜合癥、急性前葡萄膜炎、葡萄膜炎伴強(qiáng)直性脊柱炎、少年兒童葡萄膜炎）相關(guān)。
　　方法:對于TLRs基因的五個(gè)多態(tài)位點(diǎn)TLR2的rs2289318，TLR4的rs

3、7037117，TLR9的(rs187084，rs352139，rs352140)我們進(jìn)行了兩個(gè)階段的病例對照相關(guān)性研究。第一階段我們使用400個(gè)Behcet病患者，400個(gè)VKH綜合征患者，400個(gè)急性前葡萄膜炎伴或不伴強(qiáng)直性脊柱炎患者，400個(gè)兒童葡萄膜炎患者均以600個(gè)正常人作對照，將上述病例及正常人進(jìn)行測序和PCR-RFLP。第二階段，發(fā)現(xiàn)P值＜0.05的基因多態(tài)位點(diǎn)，擴(kuò)大樣本量再次驗(yàn)證。 TLR8的rs3764880位于X性染

4、色體上，以熒光探針的方法對其進(jìn)行基因分型。我們在基因分型時(shí)，分別計(jì)算了該基因的頻率在兩種性別上的分布。
　　結(jié)果:正常人的TLRs基因的六個(gè)SNP的分型結(jié)果均符合哈迪溫伯格平衡。P均大于0.05。我們進(jìn)行第一階段基因分型后。發(fā)現(xiàn)在Behcet病中，TLR2的rs2289318位點(diǎn)，其CC基因型和等位基因C的頻率均顯著高于對照組(pc=0.036，OR=1.537，95％CI1.175-2.011; pc=0.018，OR=1.48

5、9，95％ CI1.180-1.878)。其他基因和位點(diǎn)進(jìn)行幫費(fèi)羅尼校正（如為基因型則所得P值乘以本次研究的基因型個(gè)數(shù)再乘以位點(diǎn)數(shù)量;如為等位基因則所得P值乘以本次研究的位點(diǎn)數(shù)量）后我們發(fā)現(xiàn)它們的統(tǒng)計(jì)學(xué)沒有差異。此后，我們將Behcet病患者和正常人的樣本量擴(kuò)大至838比1600，進(jìn)一步驗(yàn)證了TLR2的rs2289318位點(diǎn)與Behcet病發(fā)病有關(guān)，其CC基因型和等位基因C的頻率分別為(pc=0.001，OR=1.462,95％ CI1

6、.223-1.747; pc=1.55×10-5, OR=1.470,95％ CI1.260-1.714)。擴(kuò)大樣本量后，發(fā)現(xiàn)其GG基因型在校正后也具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(pc=0.001，OR=0.363，95％ CI0.220-0.601)另外五個(gè)位點(diǎn)的頻率在病人和正常人之間沒有顯著差異。我們還將這四個(gè)基因多態(tài)與Behcet病病人的臨床表現(xiàn)進(jìn)行分層分析，我們發(fā)現(xiàn)在有皮損的BD病人中，TLR2的多態(tài)位點(diǎn)rs2289318的CC基因型和C等位基

7、因頻率是明顯增高的。其它五個(gè)位點(diǎn)的基因型在有皮損BD病人中的頻率無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。
　　正常人的TLRs基因的六個(gè)SNP的分型結(jié)果均符合哈迪溫伯格平衡。P均大于0.05。進(jìn)行第一階段基岡分型后，發(fā)現(xiàn)在VKH綜合征和正常對照的TLRs基因的6個(gè)SNP的等位基因及基因頻率與正常對照之間無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。
　　正常人的TLRs基因的六個(gè)SNP的分型結(jié)果均符合哈迪溫伯格平衡。P均大于0.05。進(jìn)行第一階段基因分型后，發(fā)現(xiàn)在急性前葡萄膜炎伴或

8、不伴強(qiáng)直性脊柱炎的TLRs基因6個(gè)SNP的等位基因及基因頻率與正常對照之間無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。
　　正常人的TLRs基因的六個(gè)SNP的分型結(jié)果均符合哈迪溫伯格平衡。P均大于0.05。進(jìn)行第一階段基因分型后，兒童葡萄膜炎的TLRs基因6個(gè)SNP的等位基因及基因頻率與正常對照之間無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。
　　結(jié)論:TLRs基因多態(tài)與Behcet病發(fā)病相關(guān)。TLR2的rs2289318位點(diǎn)，其CC基因型和等位基因C可能是Behcet病的易感基因，