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文檔簡(jiǎn)介
1、目的:
研究大鼠局灶性腦缺血再灌注后,星形膠質(zhì)纖維酸蛋白(GFAP)與高遷移率族蛋白(HMGB1)在海馬CA1區(qū)表達(dá)變化,探討GFAP與HMGB1二者之間是否相關(guān)。
方法:
1、實(shí)驗(yàn)動(dòng)物:體重250~310g普通級(jí)成年雄性SD大鼠60只(安徽醫(yī)科大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供)。
2、實(shí)驗(yàn)動(dòng)物分組:60只雄性SD大鼠隨機(jī)分為假手術(shù)組及缺血組,兩組再分為1 d,3 d,7 d,14 d,28
2、d ,5個(gè)亞組,每個(gè)亞組6只大鼠。
3、動(dòng)物模型的制備:參照Longa[1]線栓法制作大鼠大腦中動(dòng)脈阻塞再灌注(MCAO/R)模型。采用大腦中動(dòng)脈栓塞2h制備SD大鼠腦缺血模型;假手術(shù)組不插入線栓,余手術(shù)過程同缺血組。
4、蘇木素-伊紅染色:HE染色觀察海馬CA1區(qū)的病理變化。
5、免疫組化:用免疫組化法觀察在海馬CA1區(qū)域GFAP和HMGB1在腦缺血1 d,3 d,7 d,14 d,28 d后
3、表達(dá)情況。
6、免疫熒光雙標(biāo):用免疫熒光雙標(biāo)結(jié)合激光共聚焦分析腦缺血后在海馬CA1區(qū)域GFAP和HMGB1時(shí)程表達(dá)變化。
7、統(tǒng)計(jì)學(xué)分析:應(yīng)用spss13.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)處理,兩組均數(shù)間比較采用t檢驗(yàn),多組均數(shù)比較采用單因素方差分析。以α=0.05作為檢驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn),實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差(±s)表示。
結(jié)果:
1.對(duì)照組大部分細(xì)胞形態(tài)正常未發(fā)現(xiàn)明顯病理變化,缺血再灌注組隨著時(shí)間變化
4、可見膠質(zhì)細(xì)胞增生、肥大,間質(zhì)水腫,細(xì)胞水腫,神經(jīng)元細(xì)胞壞死、核萎縮,在阻塞區(qū)域,炎性細(xì)胞明顯增加。
2.與假手術(shù)組比較,腦缺血組各時(shí)間點(diǎn)腦組織GFAP、HMGB1表達(dá)均顯著增加(P<0.05)。
3.腦缺血組中再灌注7 d時(shí)GFAP表達(dá)最多,再灌注14 d時(shí)HMGB1表達(dá)最多(P<0.05)。
4.腦缺血組大鼠腦組織GFAP與HMGB1表達(dá)成正相關(guān)且在海馬CA1區(qū)存有共定位細(xì)胞(r1=0.499
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