姜黃素對(duì)膿毒癥大鼠肺組織高遷移率族蛋白B1表達(dá)的影響.pdf

1、【目的】 動(dòng)態(tài)觀察盲腸結(jié)扎穿孔(cecal ligation and puncture,CLP)膿毒癥模型大鼠肺組織高遷移率族蛋白B1(high mobility group box1protein,HMGB1)mRNA 和蛋白表達(dá)水平,研究姜黃素(curcumin，Cur)對(duì)肺組織HMGB1 基因和蛋白表達(dá)的影響，探討Cur對(duì)膿毒癥大鼠急性肺損傷(acute lung injury,ALI)的保護(hù)作用及其可能機(jī)制，為膿毒癥患者

2、器官功能保護(hù)提供新的理論依據(jù)。 【方法】 136只SPF級(jí)雄性成年SD大鼠隨機(jī)分為假手術(shù)組(A組)、模型組(B組)、Cur處理組(C組)、溶劑處理組(D組)，每組均為34只。A組開腹后輕拉盲腸后將其回納腹腔，逐層縫合腹壁，其余各組均采用CLP術(shù)制作大鼠膿毒癥模型；A組和B組均在術(shù)后 0h、12h、24h、36h、48h 分別予腹腔注射(i.p.)生理鹽水(NS)2ml/kg;C組在術(shù)后相同時(shí)間點(diǎn)予Cur(DMSO作溶劑配

3、制成50mg/ml，給藥劑量為100mg/kg.i.P.);D組單純給DMSO(2m/kg,i.P.)。各組均在術(shù)后3h、6h、12h、24h、48h、72h 隨機(jī)處死大鼠4只,無菌留取大鼠肺組織待測(cè),每組留10只不殺用以觀察5天生存率。采用逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)(RT-PCR)法和免疫組織化學(xué)(IHC)法分別檢測(cè)肺組織中HMGB1 mRNA和HMGB1蛋白水平,同時(shí)觀察胞漿HMGB1在細(xì)胞分布情況；用分光光度比色法檢測(cè)肺組織髓過氧化物酶(

4、myeloperoxidase,MPO)活性;熱干法稱取肺組織濕重/干重(wet weight/dryweight,WW/DW)比值,并在活殺前對(duì)大鼠膿毒癥嚴(yán)重程度進(jìn)行評(píng)分。觀察 Cur 對(duì)膿毒癥大鼠嚴(yán)重程度評(píng)分、生存時(shí)間、HMGB1 mRNA與蛋白表達(dá)、MPO活性以及WW/DW比值的影響,分析HMGB1水平與膿毒癥嚴(yán)重程度以及MPO活性的相關(guān)關(guān)系。 【結(jié)果】 1.A組各時(shí)間點(diǎn)膿毒癥評(píng)分差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，B、C、D組膿毒

5、癥評(píng)分較A組同期水平明顯升高(P<0.01)，從6h開始增高，24h達(dá)到高峰并維持至48h,72h評(píng)分仍顯著高于組內(nèi)6h(P<0.05)；C組各時(shí)間點(diǎn)評(píng)分均顯著低于B組、D組同期水平(p<0.05),B、D組同期評(píng)分差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。A、B、C、D組半數(shù)生存時(shí)間依次為120.0h、63.8 h、96.4 h和61.2h；除B、D組間差異不明顯(P>0.05)，其余倆倆組間差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。 2.

6、A組各時(shí)間點(diǎn)大NHMGB1 mRNA和HMGB1均有微量表達(dá),差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。B、C、D組HMGB1 mRNA和HMGB1蛋白從6h開始表達(dá)增多，以12h～24h為顯著,48h開始下降,72h仍高于A組。C組同期水平較B組、D組低(P<0.05)，但仍比A組高其差異有顯著性(P<0.05)；B組和D組同期水平差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；A組胞漿未見明顯HMGB1表達(dá)，B、C、D組胞漿HMGB1表達(dá)有所增加，以24h 為明顯，C組

7、24h的HMGB1胞漿表達(dá)率較B組、D組明顯下降(P<0.05);B組和D組胞漿表達(dá)率差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。 3.A組各時(shí)點(diǎn)MPO活性無明顯差異,B、D組CLP后3h MPO活性開始升高,24h達(dá)峰值，48h開始有所回落，72h降至組內(nèi)3h水平，但與A組同期水平差異仍有顯著性(P<0.05)，B、D組同期水平差異不明顯(P>0.05)。C組較B、D組同期水平低(P<0.05)但較A組顯著升高(P<0.05)。

8、 4.A組肺組織WW/DW比值較B、C、D低，差異有顯著性(P<0.05),C組比值介于A組與B、D組之間，除B組和D組間差異不明顯外(P>0.05)，其余組間差異具顯著性(P<0.05)。 5.HMGB1表達(dá)與膿毒癥嚴(yán)重程度評(píng)分以及MPO活性顯著正相關(guān),相關(guān)系數(shù)分別為0.742、0.717(P<0.01)。 【結(jié)論】 1.嚴(yán)重腹腔感染可明顯上調(diào)膿毒癥大鼠肺組織HMGB1 mRNA和HMGB1蛋白表達(dá)水平。局部組

9、織HMGB1持續(xù)表達(dá)與感染后ALI的發(fā)病過程密切相關(guān)。HMGB1與大鼠膿毒癥嚴(yán)重程度及預(yù)后關(guān)系密切，可作為判斷膿毒癥嚴(yán)重程度及預(yù)后的指標(biāo)之一。 2.Cur能顯著抑制膿毒癥大鼠肺組織 HMGB1 mRNA 和蛋白表達(dá)水平,同時(shí)抑制HMGB1從胞核內(nèi)向胞漿移位,減少胞漿內(nèi)HMGB1的表達(dá)。 3.Cur可能通過抑制肺組織HMGB1下調(diào)膿毒癥大鼠肺組織MPO活性，減輕肺組織PMN肺浸潤(rùn)，減緩LPS誘導(dǎo)的肺損傷程度，提高了膿毒癥大