高遷移率族蛋白B1對肝癌細(xì)胞侵襲能力的影響及機(jī)制的初步研究.pdf

1、目的：原發(fā)性肝癌是臨床上最常見的惡性腫瘤之一,根據(jù)最新統(tǒng)計(jì),全世界每年新發(fā)肝癌患者約六十萬,居惡性腫瘤的第五位。關(guān)于HMGB1與肝細(xì)胞癌關(guān)系的研究也已開展。有研究表明HMGB1在胃癌、食管癌、胰腺癌、結(jié)腸癌中表達(dá)增高,但具體作用機(jī)制尚不明確。本實(shí)驗(yàn)研究,我們通過檢測肝癌、癌旁組織及正常肝組織中HMGB1的表達(dá)情況,并使用RNA干擾技術(shù)合成針對高遷移率族蛋白B1(HMGB1)的siRNA,觀察其對人肝癌細(xì)胞株HepG2侵襲遷移能力的影響,

2、并對其意義及機(jī)制進(jìn)行探討分析。
　　方法：(1)收集取病理證實(shí)的肝細(xì)胞癌組織標(biāo)本10例,另選取經(jīng)病理證實(shí)為肝細(xì)胞癌癌旁的正常肝組織10例作為對照。用逆轉(zhuǎn)錄-聚合酶鏈反應(yīng)(RT-PCR)及蛋白印跡法(Western blot)檢測肝癌與癌旁組織、人肝癌細(xì)胞株HepG2與正常肝細(xì)胞株L-02中HMGB1表達(dá)的差異;(2)RNA干擾技術(shù)合成3對特異性針對HMGB1的HMGB1-siRNA并轉(zhuǎn)染HepG2,設(shè)置空白組與對照組,并使用Wes

3、tern blot技術(shù)檢測沉默效果;(3)選擇沉默效果最好的HMGB1-siRNA,應(yīng)用跨膜遷移實(shí)驗(yàn)、平面遷移實(shí)驗(yàn)檢測細(xì)胞侵襲遷移能力的變化;(4)通過逆轉(zhuǎn)錄-聚合酶鏈反應(yīng)(RT-PCR)及蛋白印跡法(Western blot)方法進(jìn)一步分別測定HMGB1-siRNA轉(zhuǎn)染進(jìn)入HepG2后的MMP2、MMP9、ICAM1和TIMP2的mRNA和蛋白表達(dá)水平。
　　結(jié)果：實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明肝癌組織較癌旁組織HMGB1表達(dá)水平明顯增加,肝癌細(xì)

4、胞株HepG2較正常肝細(xì)胞株L-02中HMGB1也明顯增高(均P<0.05);HMGB1-siRNA轉(zhuǎn)染后可明顯降低HepG2中HMGB1的表達(dá),其中HMGB1-siRNA-1的沉默效率最高(P<0.05),用40nM的HMGB1-siRNA-1對HMGB1的抑制效率在24、48、72h均達(dá)80％以上,96h后明顯下降(均P<0.05);用40nM的HMGB1-siRNA-1轉(zhuǎn)染HepG2,24h后HepG2細(xì)胞遷移和侵襲能力下降(均P

5、<0.05)。轉(zhuǎn)染后MMP2、MMP9、ICAM1的mRNA表達(dá)明顯下調(diào),而TIMP2的mRAN表達(dá)明顯上調(diào)(均P<0.05)。
　　結(jié)論：HMGB1在肝癌中高表達(dá),可促進(jìn)肝癌細(xì)胞的侵襲遷移,通過HMGB1-siRNA抑制肝癌細(xì)胞中HMGB1表達(dá)可明顯降低腫瘤細(xì)胞侵襲遷移能力。HMGB1表達(dá)抑制后,MMP2、MMP9、ICAM1表達(dá)下調(diào),TIMP2表達(dá)上調(diào),說明HMGB1對肝癌細(xì)胞的侵襲遷移能力與MMP2、MMP9、ICAM1和T