高遷移率族蛋白B1對大鼠脾臟樹突狀細胞免疫功能影響及機制研究.pdf

1、目的：高遷移率族蛋白B1(HMGB1)作為一種晚期炎癥介質(zhì)，介導了膿毒癥和其他系統(tǒng)性炎癥的致死性效應，研究其病理生理作用將有助于深化對膿毒癥發(fā)病機制的認識，并為免疫反應的調(diào)控提供潛在的干預目標。本試驗擬應用HMGB1體外刺激大鼠脾臟樹突狀細胞(DC)，闡明HMGB1對DC免疫功能的影響并對其機制進行初步探討，旨在為膿毒癥及多器官功能障礙綜合征的預防和治療提供新思路。 方法：分離正常Wistar大鼠脾臟DC，在含10％小牛血清的1

2、640培養(yǎng)液中調(diào)整細胞濃度1×10<'6>/孔后置于24孔培養(yǎng)板。實驗一：采用HMGB1刺激，觀察HMGB1刺激與DC表面共刺激分子CD80、CD86和主要組織相容性復合物(MHC)Ⅱ表達、細胞因子白介素(IL)-12、腫瘤壞死因子(TNF)-α基因表達和蛋白合成的時間-效應關(guān)系及劑量-效應關(guān)系。實驗二：HMGB1刺激后，采用激光掃描共聚焦顯微鏡和流式細胞術(shù)檢測DC表面晚期糖基化終末產(chǎn)物受體(RAGE)的表達強度。同時觀察抗RAGE抗體

3、對HMGB1刺激后DC表面共刺激分子CD80、CD86和MHC Ⅱ表達的影響。實驗三：采用1μg/ml的HMGB1刺激48小時(h)，DC與脾T淋巴細胞的細胞比例分別為1：50、1：100、1：150、1：200混合，于共同作用后3天、5天觀察T淋巴細胞增殖反應、功能性極化、IL-2、白介素-2受體(IL-2R)基因/蛋白表達及核因子(NF)-кB活性的情況。 結(jié)論： 1．HMGB1能誘導DC表面共刺激分子表達增強和IL