清火敗毒飲調(diào)理巨噬細(xì)胞高遷移率族蛋白1表達(dá)的研究.pdf

1、本文研究目的：以燒傷血清及中藥清火敗毒飲方(Qing Huo Bai DuYin，QHBDY)血清干預(yù)RAW264.7巨噬細(xì)胞，觀察晚期炎癥因子高遷移率族蛋白 1(high mobility group box chromosomal protein 1，HMGB1)在RAW264.7巨噬細(xì)胞中表達(dá)的變化情況，以求了解中藥QHBDY抗炎癥反應(yīng)的細(xì)胞內(nèi)源性保護(hù)機(jī)制。 方法：以RAW264.7巨噬細(xì)胞為研究對象，通過SD大鼠正常血清

2、、燒傷血清和中藥血清干預(yù)細(xì)胞，應(yīng)用瑞氏染色觀察細(xì)胞形態(tài)學(xué)的變化；四唑鹽比色試驗(yàn)(MTT比色試驗(yàn))了解血清干預(yù)后細(xì)胞活力的變化；RT-PCR技術(shù)了解細(xì)胞中HMGB1表達(dá)的變化情況。 結(jié)果：應(yīng)用5％、10％和20％濃度的正常血清、燒傷血清和中藥血清干預(yù)RAW264．7細(xì)胞，①不同濃度的同類血清對RAW264.7巨噬細(xì)胞的活力影響無顯著差異，無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)；②相同濃度的三種血清均使細(xì)胞的活力隨著干預(yù)時(shí)間的延長逐漸減低，且

3、中藥血清組活性>燒傷血清組活性>正常血清組活性，其影響存在差異(P<0.05)；③相同時(shí)間點(diǎn)用不完全培養(yǎng)基培養(yǎng)的RAW264.7細(xì)胞的吸光光度值(OD)低于完全培養(yǎng)基培養(yǎng)的RAW264.7細(xì)胞的OD值，兩組比較具有差異性(P<0.05)，因此小牛血清可為細(xì)胞生長提供營養(yǎng)物質(zhì)。 以20％濃度的正常血清、燒傷血清和中藥血清干預(yù)RAW264.7細(xì)胞，應(yīng)用RT-PCR技術(shù)檢測細(xì)胞中HMGB1表達(dá)的變化，發(fā)現(xiàn)①正常RAW264.7巨噬細(xì)胞

4、中有少量HMGB1表達(dá)；②正常血清干預(yù)RAW264.7巨噬細(xì)胞后，HMGB1的表達(dá)量在正常RAW264.7巨噬細(xì)胞HMGB1表達(dá)量水平周圍波動(dòng)，在干預(yù)后24小時(shí)及48小時(shí)出現(xiàn)兩個(gè)小的高峰期，與正常RAW264.7巨噬細(xì)胞HMGB1表達(dá)量無顯著差異，無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)；③應(yīng)用燒傷血清干預(yù)的RAW264.7巨噬細(xì)胞，其HMGB1的表達(dá)量在干預(yù)3小時(shí)增高后又降為低水平表達(dá)，至18小時(shí)后急劇增加，于36小時(shí)達(dá)到高峰(為正常水平的15～