氯尼達(dá)明單獨(dú)和聯(lián)合更生霉素用藥對(duì)JEG-3和BeWo絨癌細(xì)胞抗腫瘤作用的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、研究背景和目的:絨癌是主要發(fā)生于生育年齡婦女的惡性腫瘤，也是人類最早治愈的實(shí)體腫瘤之一。大部分絨癌對(duì)化療敏感，成為主要的治療手段，對(duì)藥物耐藥是治療失敗的最主要原因。如何增加腫瘤細(xì)胞對(duì)化療藥物的敏感性，同時(shí)而不增加其毒副作用，即有效增加化療藥物抗腫瘤作用的同時(shí)保證患者對(duì)化療副作用耐受是亟待解決的問(wèn)題。 線粒體在誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡過(guò)程中有重要作用。氯尼達(dá)明(LND)，直接作用于線粒體，能跨越目前經(jīng)典的耐藥途徑誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡，導(dǎo)致敏感和耐藥腫

2、瘤細(xì)胞死亡。同時(shí)，氯尼達(dá)明沒(méi)有傳統(tǒng)抗腫瘤藥物的常見(jiàn)副作用，如骨髓抑制、肝腎毒性、脫發(fā)、胃腸道粘膜壞死等，也不導(dǎo)致體細(xì)胞和生殖細(xì)胞突變。LND和多種化療藥物有協(xié)同抗腫瘤作用，毒副作用不疊加，在聯(lián)合應(yīng)用中存在潛在價(jià)值。 目前國(guó)內(nèi)外尚沒(méi)有關(guān)于LND單藥和聯(lián)合化療治療滋養(yǎng)細(xì)胞腫瘤的報(bào)道。更生霉素(Dactinomycin，KSM)是治療滋養(yǎng)細(xì)胞腫瘤常見(jiàn)藥物，本研究目的是明確LND對(duì)于滋養(yǎng)細(xì)胞腫瘤抗腫瘤作用機(jī)制以及評(píng)估單藥和聯(lián)合KSM用藥

3、的有效性。 研究方法: 1.采用alamarBlue法觀察LND、KSM單藥和聯(lián)合用藥作用于JEG-3和BeWo絨癌細(xì)胞對(duì)細(xì)胞致死率的影響。 2.JEG-3和BeWo絨癌細(xì)胞中，觀察LND對(duì)腫瘤細(xì)胞線粒體膜電位改變、細(xì)胞色素C釋放和細(xì)胞凋亡的影響，明確LND對(duì)絨癌細(xì)胞的作用機(jī)制。 3.建立絨癌裸鼠移植瘤模型，采用LND單藥和聯(lián)合KSM用藥，觀察移植瘤體積、重量、病理形態(tài)學(xué)改變、絨癌細(xì)胞β-HCG合成分泌水

4、平、裸鼠血β-HCG水平和骨髓抑制情況，進(jìn)一步了解LND單藥和聯(lián)合KSM用藥對(duì)絨癌細(xì)胞的作用效果以及毒副作用。 研究結(jié)果: 1.用alamarBlue法測(cè)定LND作用于JEG-3和BeWo絨癌細(xì)胞的細(xì)胞存活率顯示，隨著LND用藥濃度的增加，抑制腫瘤細(xì)胞增殖作用逐漸增加。測(cè)定LND單藥、KSM單藥和聯(lián)合用藥的腫瘤細(xì)胞半數(shù)致死量，即IC50，結(jié)果表明LND對(duì)兩種絨癌細(xì)胞均有抑制瘤細(xì)胞增長(zhǎng)的作用，聯(lián)合KSM用藥，明顯增加KSM

5、的抑瘤作用。說(shuō)明LND具有抑制JEG-3和BeWo絨癌腫瘤細(xì)胞增殖作用，和KSM聯(lián)合用藥較單獨(dú)用藥效果更明顯。 2.LND作用于JEG-3和BeWo絨癌細(xì)胞，導(dǎo)致線粒體膜電位(Δψm)下降、細(xì)胞色素C向胞漿釋放、pro-caspase3增加、caspase3活化、細(xì)胞核出現(xiàn)典型的凋亡形態(tài)學(xué)改變，DNAladder形成。說(shuō)明LND對(duì)JEG-3和BeWo絨癌細(xì)胞有誘導(dǎo)凋亡作用。 3.移植瘤裸鼠模型中，LND、KSM單藥和聯(lián)合

6、用藥均能使移植瘤體積、重量減小，聯(lián)合用藥作用最明顯。JEG-3絨癌細(xì)胞移植瘤的病理形態(tài)中見(jiàn)到大量出血和壞死。用藥后裸鼠血β-HCG水平下降，絨癌細(xì)胞合成分泌β-HCG減少，聯(lián)合用藥組最明顯。BeWo絨癌細(xì)胞移植瘤的病理形態(tài)中沒(méi)有明顯的腫瘤組織出血和壞死。裸鼠血β-HCG水平低，變化沒(méi)有規(guī)律。LND和KSM單獨(dú)或者聯(lián)合用藥對(duì)裸鼠外周血細(xì)胞計(jì)數(shù)沒(méi)有影響，但是LND和對(duì)照組骨髓增生程度相同，均顯示為增生極度活躍，KSM單藥和LND+KSM聯(lián)合

7、用藥組的骨髓增生活躍程度較前差，但是組間沒(méi)有明顯區(qū)別。說(shuō)明LND在體內(nèi)實(shí)驗(yàn)中能抑制絨癌移植瘤生長(zhǎng)，與KSM聯(lián)合用藥抗絨癌細(xì)胞作用較單獨(dú)用藥更有效，同時(shí)沒(méi)有骨髓抑制的副作用。 結(jié)論: 1.LND具有抑制JEG-3和BeWo絨癌細(xì)胞增殖的作用，聯(lián)合KSM用藥較單獨(dú)用藥效果更明確。 2.LND通過(guò)改變JEG-3和BeWo絨癌細(xì)胞內(nèi)線粒體膜通透性、使細(xì)胞色素C向胞漿釋放，激活caspase3途徑誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡。 3