氯尼達明單獨和聯(lián)合更生霉素用藥對JEG-3和BeWo絨癌細胞抗腫瘤作用的實驗研究.pdf

1、研究背景和目的:絨癌是主要發(fā)生于生育年齡婦女的惡性腫瘤，也是人類最早治愈的實體腫瘤之一。大部分絨癌對化療敏感，成為主要的治療手段，對藥物耐藥是治療失敗的最主要原因。如何增加腫瘤細胞對化療藥物的敏感性，同時而不增加其毒副作用，即有效增加化療藥物抗腫瘤作用的同時保證患者對化療副作用耐受是亟待解決的問題。 線粒體在誘導細胞凋亡過程中有重要作用。氯尼達明(LND)，直接作用于線粒體，能跨越目前經典的耐藥途徑誘導細胞凋亡，導致敏感和耐藥腫

2、瘤細胞死亡。同時，氯尼達明沒有傳統(tǒng)抗腫瘤藥物的常見副作用，如骨髓抑制、肝腎毒性、脫發(fā)、胃腸道粘膜壞死等，也不導致體細胞和生殖細胞突變。LND和多種化療藥物有協(xié)同抗腫瘤作用，毒副作用不疊加，在聯(lián)合應用中存在潛在價值。 目前國內外尚沒有關于LND單藥和聯(lián)合化療治療滋養(yǎng)細胞腫瘤的報道。更生霉素(Dactinomycin，KSM)是治療滋養(yǎng)細胞腫瘤常見藥物，本研究目的是明確LND對于滋養(yǎng)細胞腫瘤抗腫瘤作用機制以及評估單藥和聯(lián)合KSM用藥

3、的有效性。 研究方法: 1.采用alamarBlue法觀察LND、KSM單藥和聯(lián)合用藥作用于JEG-3和BeWo絨癌細胞對細胞致死率的影響。 2.JEG-3和BeWo絨癌細胞中，觀察LND對腫瘤細胞線粒體膜電位改變、細胞色素C釋放和細胞凋亡的影響，明確LND對絨癌細胞的作用機制。 3.建立絨癌裸鼠移植瘤模型，采用LND單藥和聯(lián)合KSM用藥，觀察移植瘤體積、重量、病理形態(tài)學改變、絨癌細胞β-HCG合成分泌水

4、平、裸鼠血β-HCG水平和骨髓抑制情況，進一步了解LND單藥和聯(lián)合KSM用藥對絨癌細胞的作用效果以及毒副作用。 研究結果: 1.用alamarBlue法測定LND作用于JEG-3和BeWo絨癌細胞的細胞存活率顯示，隨著LND用藥濃度的增加，抑制腫瘤細胞增殖作用逐漸增加。測定LND單藥、KSM單藥和聯(lián)合用藥的腫瘤細胞半數(shù)致死量，即IC50，結果表明LND對兩種絨癌細胞均有抑制瘤細胞增長的作用，聯(lián)合KSM用藥，明顯增加KSM

5、的抑瘤作用。說明LND具有抑制JEG-3和BeWo絨癌腫瘤細胞增殖作用，和KSM聯(lián)合用藥較單獨用藥效果更明顯。 2.LND作用于JEG-3和BeWo絨癌細胞，導致線粒體膜電位(Δψm)下降、細胞色素C向胞漿釋放、pro-caspase3增加、caspase3活化、細胞核出現(xiàn)典型的凋亡形態(tài)學改變，DNAladder形成。說明LND對JEG-3和BeWo絨癌細胞有誘導凋亡作用。 3.移植瘤裸鼠模型中，LND、KSM單藥和聯(lián)合

6、用藥均能使移植瘤體積、重量減小，聯(lián)合用藥作用最明顯。JEG-3絨癌細胞移植瘤的病理形態(tài)中見到大量出血和壞死。用藥后裸鼠血β-HCG水平下降，絨癌細胞合成分泌β-HCG減少，聯(lián)合用藥組最明顯。BeWo絨癌細胞移植瘤的病理形態(tài)中沒有明顯的腫瘤組織出血和壞死。裸鼠血β-HCG水平低，變化沒有規(guī)律。LND和KSM單獨或者聯(lián)合用藥對裸鼠外周血細胞計數(shù)沒有影響，但是LND和對照組骨髓增生程度相同，均顯示為增生極度活躍，KSM單藥和LND+KSM聯(lián)合

7、用藥組的骨髓增生活躍程度較前差，但是組間沒有明顯區(qū)別。說明LND在體內實驗中能抑制絨癌移植瘤生長，與KSM聯(lián)合用藥抗絨癌細胞作用較單獨用藥更有效，同時沒有骨髓抑制的副作用。 結論: 1.LND具有抑制JEG-3和BeWo絨癌細胞增殖的作用，聯(lián)合KSM用藥較單獨用藥效果更明確。 2.LND通過改變JEG-3和BeWo絨癌細胞內線粒體膜通透性、使細胞色素C向胞漿釋放，激活caspase3途徑誘導細胞凋亡。 3