雌、孕激素對(duì)人絨癌細(xì)胞系JEG-3侵襲性影響及其機(jī)制研究.pdf

1、人早孕滋養(yǎng)層細(xì)胞適當(dāng)侵入子宮內(nèi)膜（植入）是成功妊娠的關(guān)鍵，滋養(yǎng)層細(xì)胞的侵入過(guò)程包含大量復(fù)雜的、彼此聯(lián)系的事件，受到嚴(yán)格的時(shí)空調(diào)控。滋養(yǎng)層細(xì)胞侵襲過(guò)度或不足均可導(dǎo)致病理性妊娠如先兆子癇、妊娠高血壓綜合征等疾病的發(fā)生。滋養(yǎng)細(xì)胞通過(guò)分泌蛋白酶類而獲得侵襲能力，基質(zhì)金屬蛋白酶是其中重要的一種，MMPs活性依賴于鋅、鈣離子，其主要的生理功能是降解細(xì)胞外基質(zhì)成分并重塑細(xì)胞外基質(zhì)。有研究指出：滋養(yǎng)細(xì)胞MMP-2和/或MMP-9表達(dá)水平的變化在調(diào)節(jié)滋養(yǎng)

2、細(xì)胞侵襲過(guò)程中起關(guān)鍵作用。雌、孕激素是調(diào)控妊娠早期滋養(yǎng)細(xì)胞侵襲性，以使胚胎正常植入并維持妊娠成功的關(guān)鍵因素，對(duì)其調(diào)節(jié)機(jī)制的研究，有助于更好的理解病理性妊娠并為滋養(yǎng)層侵襲性疾病的防治提供新的思路。氧分壓變化是妊娠早期顯著的特征性微環(huán)境，因此，具有細(xì)胞“氧感受器”樣效應(yīng)的缺氧誘導(dǎo)因子（HIF），以及腺苷及其受體信號(hào)系統(tǒng)在細(xì)胞侵襲行為調(diào)控中的作用倍受關(guān)注，然而JEG-3細(xì)胞的相關(guān)研究尚未見(jiàn)報(bào)道。基于此，本研究利用絨癌細(xì)胞腫瘤細(xì)胞系JEG-3細(xì)

3、胞作為滋養(yǎng)細(xì)胞模型，觀察分析體外模擬妊娠早期雌、孕激素環(huán)境條件下JEG-3細(xì)胞侵襲相關(guān)酶類的表達(dá)變化，以及腺苷受體信號(hào)通路在其侵襲性調(diào)節(jié)中的作用。 1．目的: 體外模擬妊娠早期母胎界面微環(huán)境，檢測(cè)雌、孕激素對(duì)絨癌細(xì)胞系JEG-3細(xì)胞形態(tài)、侵襲功能的影響及其機(jī)制，揭示母胎界面微環(huán)境中滋養(yǎng)層細(xì)胞侵襲行為的的分子基礎(chǔ)，為滋養(yǎng)層細(xì)胞疾病與雌激素、孕激素的關(guān)系提供進(jìn)一步的理論依據(jù)，從而有利于滋養(yǎng)層細(xì)胞疾病發(fā)病與治療的認(rèn)識(shí)。

4、 2．方法: 2．1 JEG-3絨癌細(xì)胞的培養(yǎng)與收集； 2．2 倒置顯微鏡觀測(cè)JEG-3絨癌細(xì)胞形態(tài)； 2．3 RT-PCR．檢測(cè)JEG-3絨癌細(xì)胞腺苷受體的表達(dá)； 2．4 Real time-PCR定量檢測(cè)JEG-3絨癌細(xì)胞腺苷受體A2bR表達(dá)； 2．5明膠酶譜檢測(cè)JEG-3細(xì)胞金屬基質(zhì)蛋白酶MMP-2、MMP-9的分泌 3．結(jié)果: 3．1 雌、孕激素對(duì)JEG-3細(xì)胞形態(tài)無(wú)顯著性

5、影響（P<0．05） 3．2 JEG-3絨癌細(xì)胞表達(dá)MMP-2及MMP-9，雌、孕激素顯著上調(diào)JEG-3細(xì)胞MMP-2表達(dá)（P<0．05） 3．3 JEG-3絨癌細(xì)胞表達(dá)三種腺苷受體A1R，A2aR，A2bR，雌激素和/或孕激素條件下表達(dá)上調(diào)的基因是A2bR（P<0．05），A1R、A2aR的表達(dá)沒(méi)有顯著變化。 3．4 雌、孕激素影響JEG-3細(xì)胞A2bR mRNA表達(dá)，顯著升高兩倍（P<0．05） 3．

6、5 特異性阻斷A2bR通路JEG-3細(xì)胞分泌MMP-2顯著減少（P<0．05） 4. 結(jié)論: 4．1 雌激素、孕激素及雌孕激素聯(lián)合處理對(duì)JEG-3滋養(yǎng)細(xì)胞系形態(tài)均無(wú)顯著性影響。 4．2 JEG-3細(xì)胞表達(dá)MMP-2及MMP-9，但MMP-9的表達(dá)顯著弱于MMP-2，提示MMP-2可能是JEG-3細(xì)胞侵襲細(xì)胞外基質(zhì)的主要酶類。 4．3 絨癌細(xì)胞系JEG-3表達(dá)三種腺苷受體，雌激素和孕激素顯著上調(diào)腺苷受體A2