家兔慢性細(xì)菌性鼻竇炎鼻黏膜創(chuàng)傷修復(fù)的研究.pdf

1、第一部分家兔鼻竇黏膜創(chuàng)傷修復(fù)的病理生理過程及相關(guān)細(xì)胞因子的表達(dá)
　　目的：了解家兔鼻竇黏膜創(chuàng)傷修復(fù)的病理生理過程,并檢測相關(guān)細(xì)胞因子的表達(dá)。
　　方法：以家兔作為研究對象,并用4mm電鉆在上頜竇內(nèi)側(cè)壁造口制作創(chuàng)傷修復(fù)動物模型。分別于術(shù)后第2、4、6、8、10、14天各處死4只家兔,取上頜竇內(nèi)側(cè)壁記錄造口的孔徑,并用HE染色(HematoxylinandEosinStaining,HEStaining)和Masson三染色法觀

2、察再生鼻竇黏膜的形態(tài)學(xué)特征,酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(Enzyme-LinkedImmunosorbentAssay,ELISA)檢測創(chuàng)傷修復(fù)過程中再生的鼻竇黏膜中IL-6、8、10以及Ⅰ型和Ⅲ型膠原的表達(dá)。
　　結(jié)果：家兔上頜竇內(nèi)側(cè)壁在創(chuàng)傷后第4天開始,其孔徑明顯縮小,并于第14天可完全愈合。再生的上頜竇黏膜中有較多的不成熟的膠原沉積,且以Ⅰ型膠原為主,而Ⅲ型膠原的比例有所下降。再生的部分上頜竇黏膜的上皮層缺乏纖毛分化,固有層中腺體減少

3、,有時(shí)可見假性腺體結(jié)構(gòu)。術(shù)后第14天再生的鼻竇黏膜中IL-6的表達(dá)較正常組明顯升高(p＜0.0001)。術(shù)后第2、4、6、8、10天組間再生的鼻竇黏膜中IL-6表達(dá)的差異無明顯統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。術(shù)后各組再生的鼻竇黏膜中IL-8的表達(dá)明顯升高(p=0.0011)。而術(shù)后各組再生的鼻竇黏膜中IL-10的表達(dá)與正常組比較明顯降低(p=0.0003)。但術(shù)后第2、4、6、8、10、14天組間再生的鼻竇黏膜中IL-8和IL-10表達(dá)的差異沒有明顯統(tǒng)計(jì)學(xué)

4、意義。與正常對照組相比,術(shù)后各組再生的鼻竇粘膜中Ⅰ型膠原的表達(dá)明顯上升(p＜0.0001),而Ⅲ型膠原的表達(dá)明顯降低(p＜0.0001)。相關(guān)分析表明,IL-6和IL-8的高表達(dá)與Ⅰ型膠原的過度沉積有關(guān)。
　　結(jié)論：家兔上頜竇黏膜創(chuàng)傷后再生的鼻竇黏膜中有較多的膠原沉積,并伴有促炎因子IL-6、8的高表達(dá)和抑炎因子IL-10的低表達(dá)。再生的鼻竇黏膜中的膠原蛋白以Ⅰ型膠原為主,且再生的鼻竇黏膜中過量的膠原沉積與IL-6、8的高表達(dá)以及

5、IL-10的低表達(dá)有關(guān)。
　　第二部分IL-10上調(diào)表達(dá)對家兔慢性細(xì)菌性鼻竇炎黏膜創(chuàng)傷修復(fù)的影響
　　目的：觀察上調(diào)IL-10的表達(dá)對家兔慢性細(xì)菌性鼻竇炎動物模型上頜竇黏膜創(chuàng)傷修復(fù)的影響。
　　方法：以慢病毒為表達(dá)載體,上調(diào)IL-10的表達(dá)(LV-IL-10)。實(shí)驗(yàn)分三組:生理鹽水注射組、LV-IL-10治療組和LV-GFP注射組。制作家兔慢性細(xì)菌性鼻竇炎動物模型,然后在其上頜竇內(nèi)側(cè)壁用4mm電鉆進(jìn)行造口制成創(chuàng)傷模型。

6、在創(chuàng)傷前3天,各組上頜竇內(nèi)側(cè)壁黏膜下分別注射生理鹽水、LV-IL-10和LN-GFP。于創(chuàng)傷后第3天和第10天取再生的上頜竇內(nèi)側(cè)壁黏膜用Real-timePCR法和酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(Enzyme-LinkedImmunosorbentAssay,ELISA)分別在mRNA水平和蛋白水平檢測相關(guān)細(xì)胞因子的表達(dá)。HE和Masson三染色法觀察創(chuàng)傷后第10天再生黏膜的形態(tài)特征。
　　結(jié)果：創(chuàng)傷后第3天和第10天再生的上頜竇黏膜中均可見慢

7、病毒顆粒的表達(dá),但后者明顯低于前者。在創(chuàng)傷后第3天和第10天再生的上頜竇黏膜中,與生理鹽水注射組和IN-GFP注射組比較,LV-IL-10治療組的膠原沉積明顯減少,炎癥反應(yīng)較輕,IL-6以及Ⅰ型和Ⅲ型膠原的mRNA表達(dá)水平明顯下降,進(jìn)一步ELISA法分析IL-6、IL-8以及Ⅰ型和Ⅲ型膠原的蛋白表達(dá)水平也明顯下降,但三組間再生的上頜竇黏膜中TGF-βmRNA的表達(dá)無明顯差別。
　　結(jié)論：在家兔慢性細(xì)菌性鼻竇炎創(chuàng)傷修復(fù)的動物模型中,