肝細胞癌中uPA和MMP-9的表達及其意義.pdf

1、背景與目的：肝細胞癌(hepatocellular carcinoma，HCC，以下簡稱肝癌)為我國常見的惡性腫瘤，門靜脈內(nèi)生長和肝內(nèi)轉(zhuǎn)移是肝癌的生物學(xué)特征之一。腫瘤首先在肝內(nèi)直接蔓延，也可在肝內(nèi)沿門靜脈分支轉(zhuǎn)移，使肝內(nèi)出現(xiàn)多處轉(zhuǎn)移結(jié)節(jié)。肝外轉(zhuǎn)移通過淋巴道，可轉(zhuǎn)移至相關(guān)淋巴結(jié)。晚期亦可通過肝靜脈轉(zhuǎn)移至遠處臟器，預(yù)后不佳。腫瘤的浸潤轉(zhuǎn)移是各種惡性腫瘤預(yù)后差的重要因素之一。腫瘤細胞的浸潤和轉(zhuǎn)移過程依賴于各種蛋白質(zhì)水解系統(tǒng)的協(xié)同作用。其中，尿

2、激酶型纖溶酶原激活物(urokinaseplasminogen activator，uPA) 系統(tǒng)和金屬蛋白酶 (matrixmetalloproteinases，MMPs)發(fā)揮了重要作用。uPA、金屬蛋白酶-9(matrixmetalloproteinases-9，MMP-9)是降解細胞外基質(zhì)(extracellularmatrix，ECM)最重要的酶類之一，二者又與新生血管的形成，細胞間的黏附作用聯(lián)系緊密。有研究表明，二者在腫瘤細胞

3、的侵襲過程起著協(xié)同所用。但二者在肝癌中的聯(lián)合表達情況，及它們與病理、臨床相關(guān)指標的聯(lián)系目前尚無報道。本課題通過研究uPA和MMP-9在肝癌中的表達情況，從而探討uPA和MMP-9在肝癌發(fā)生、發(fā)展中的作用及其意義。 材料和方法：收集廣西醫(yī)科大學(xué)肝膽外科2004年12月-2006年4月45例肝癌病人的手術(shù)切除標本及對應(yīng)的癌旁組織和相關(guān)臨床資料，7例肝血管瘤的瘤旁肝組織作為對照組。用逆轉(zhuǎn)錄酶聚合酶鏈反應(yīng)(reverseiranscri

4、ption polymerase chain reaction，RT-PCR)方法檢測uPA和MMP-9在上述標本中的mRNA表達情況，并用凝膠掃描儀進行電泳條帶強度分析；用免疫組織化學(xué)法(immunohistochemical method)檢測uPA和MMP-9在上述標本中的蛋白表達情況，并由兩名病理科醫(yī)師采用雙盲法閱片和評分。同時將實驗結(jié)果與病理、臨床資料(伴有靜脈癌栓及肝內(nèi)外轉(zhuǎn)移形成、乙型肝炎病毒感染、病理分級、血清AFP水平、

5、腫瘤直徑)進行比較分析。 結(jié)果： 1，RT-PCR檢測45例肝癌組織uPA mRNA陽性率為100％(45/45)，相對應(yīng)的癌旁組織陽性率為84.44％(38/45)；對照組陽性率為28.57％(2/7)。三組比較均有顯著性差異(P<0.01，P<0.05)。uPA mRNA在肝癌組織中的陽性表達率與靜脈癌栓形成、肝內(nèi)外轉(zhuǎn)移明顯有關(guān)(P<0.01)，而與乙型肝炎病毒(hepatitis B virus，HBV)感染、病理

6、分級、血清AFP水平以及腫瘤直徑無明顯關(guān)系(P>0.05)。 2，RT-PCR檢測45例肝癌組織MMP-9 mRNA陽性率為100％(45/45)，相對應(yīng)的癌旁組織陽性率為86.67％(39/45)；對照組陽性率分別為57.14％(4/7)；三組比較均有顯著性差異(P<0.05，P<0.01)。MMP-9 mRNA在肝癌組織中的陽性表達率與靜脈癌栓形成、肝內(nèi)外轉(zhuǎn)移明顯有關(guān)(P<0.01)，而與HBV感染、病理分級、血清AFP水平

7、以及腫瘤直徑無明顯關(guān)系(P>0.05)。 3，免疫組化檢測uPA蛋白在肝癌中的陽性率為75.56％(34/45)，明顯高于癌旁(26.67％，12/45)及對照組(28.57％，2/7)，三組比較有顯著性差異(P<0.01，P<0.05)。并且uPA蛋白的表達與靜脈癌栓形成、肝內(nèi)外轉(zhuǎn)移明顯有關(guān)(P<0.01)，而與HBV感染、病理分級、血清AFP水平以及腫瘤直徑無明顯關(guān)系(P>0.05)。 4，免疫組化檢測MMP-9蛋白

8、在肝癌中的陽性率為66.67％(30/45)，明顯高于癌旁(22.22％，10/45)及對照組(14.29％，1/7)，三組比較有顯著性差異(P<0.01，P<0.05)。并且MMP-9蛋白的表達與靜脈癌栓形成、肝內(nèi)外轉(zhuǎn)移明顯有關(guān)(P<0.01)，而與HBV感染、病理分級、血清AFP水平以及腫瘤直徑無明顯關(guān)系(P>0.05)。 5，經(jīng)Spearman等級相關(guān)分析，uPA和MMP-9的mRNA和蛋白表達水平之間呈正相關(guān)關(guān)系(分別為