Snail、VEGF、MMP-9在肝細胞肝癌中的表達及臨床意義.pdf

1、目的：探討在肝細胞肝癌組織中Snail、VEGF、MMP-9三種生物學指標的表達，分析這三種生物學指標表達強度之間的相關性及與臨床病理因素的相關性，及其在肝細胞肝癌中侵襲、轉移的作用，以及它在癌組織中的表達對于預測肝癌浸潤轉移、惡性程度判斷是否有重要的提示作用。
　　 方法本文采用VP-9000免疫組化二步法，檢測70例肝癌組織及其癌旁組織中Snail、VEGF、MMP-9蛋白的表達，采用RT-PCR，檢測40例新鮮肝癌組織及其

2、癌旁組織中Snail、VEGF、MMP-9mRNA的表達，其中30例石蠟標本選自該院2007-2009年行手術切除且術后經病理診斷為原發(fā)性肝細胞肝癌病人，每例蠟塊均含有癌和癌旁組織。男性患者22例，女性8例。年齡36-77歲（中位年齡56.5歲）。HCC Edmondson病理分級Ⅰ級1例，Ⅱ級4例，Ⅲ級20例，Ⅳ級5例。40例新鮮肝癌組織于手術時取出，距腫瘤邊緣3～5cm切除癌旁組織，然后取無出血、壞死，生長活躍的癌組織，分別于-70

3、℃冰箱內保存，用于RT-PCR，剩余組織用40g/L多聚甲醛固定，石蠟包埋切片，用于免疫組織化學染色。
　　 結果免疫組化染色結果按染色強度的深淺積分(P)，0分：無染色，1分：弱陽性，2分：強陽性。按著色細胞百分比(I)，1分：0-25％，2分：26％-50％，3分51％-75％，4分：76％-100％，然后按照陽性細胞×染色強弱計算總分，總分<3為陰性，≥3為陽性。Snail主要表達于細胞核，肝癌組織中Snail的陽性表達率

4、高于癌旁組織中(P<0.05)，且癌組織中Snail陽性表達率與包膜侵襲、門脈侵襲及肝內轉移情況有關(P<0.05)，VEGF主要分布在胞漿，肝癌組織中VEGF的陽性表達率離子癌旁組織中(P<0.05)，且癌組織中VEGF陽性表達率與腫瘤直徑、門脈侵襲、包膜侵襲、肝內轉移有關(P<0.05)。MMP-9主要分布在胞漿，肝癌組織中MMP-9的陽性表達率高于癌旁組織中(P<0.05)，且癌組織中MMP-9陽性表達率與腫瘤直徑、門脈侵襲、包膜

5、侵襲、肝內轉移有關(P<0.05)。Snail、VEGF及MMP-9在肝癌中的表達經利用x2檢驗分析，Snail與VEGF表達呈正相關(P<0.05)：Snail與MMP-9呈正相關(P<0.05)。RT-PCR產物用1.5％瓊脂糖凝膠電泳并觀察拍照，擴增產物有相應特異性條帶，即為陽性結果，肝癌組織中SnailmRNA的陽性表達率高于癌旁組織(P<0.05)，且癌組織中SnailmRNA的陽性表達率與包膜侵襲、門脈侵襲情況有關(P＜0.

6、05)，而與肝內轉移情況無關(P>0.05)肝癌組織中VEGFmRNA的陽性表達率高于癌旁組織(P<0.05)，且癌組織中SnailmRNA的陽性表達率與包膜侵襲、門脈侵襲、肝內轉移情況有關（p＜0.05）。肝癌組織中MMP-9mRNA陽性表達率高于癌旁組織(P<0.05)，且癌組織中MMP-9mRNA的陽性表達率與包膜侵襲、門脈侵襲、肝內轉移情況有關(P<0.05)Snail、VEGF及MMP-9mRNA在肝癌中的表達經利用x2檢驗分

7、析，SnailmRNA與VEGFmRNA表達呈正相關(P<0.05)；Snail mRNA與MMP-9mRNA呈正相關(P<0.05)。
　　 結論本實驗采用免疫組化和PCR檢測肝癌及癌旁組織中Snail、VEGF、MMP-9 mRNA和蛋白的表達，得出Snail、VEGF、MMP-9mRNA和蛋白均高表達于肝癌組織中，低表達于癌旁組織中。肝癌組織中Snail、VEGF、MMP-9蛋白的表達與腫瘤直徑、病理分級及腫瘤大體無關但與

8、包膜侵襲、門脈侵襲及肝內轉移相關，可見Snail、VEGF、MMP-9在肝癌的侵襲和轉移中發(fā)揮作用，Snail、VEGF、MMP-9蛋白的高表達增強了癌細胞惡性侵襲性，使其更易發(fā)生侵襲轉移。Snail在mRNA水平上與包膜侵襲、門脈侵襲相關但并未顯示出與肝內轉移相關，推測可能與樣本量較少有關，也可能與Snail蛋白在翻譯水平上調或蛋白穩(wěn)定性增高有關。僅僅抑制E-cad的表達還不足以說明Snail在腫瘤侵襲和轉移中的作用，在Snail傳導

9、通路中還有其它分子蛋白的參與，國外某些研究已表明VEGF是處于其上游的基因產物，誘導Snail基因的啟動表達，表達后的Snail又可進一步調控其下游基因，如E-cadherin、MMP的表達，Snail可上調MMPs的表達，MMPs可降解細胞外基質促進腫瘤細胞的轉移。這需要更多的研究來充分的了解Snail在HCCs中的作用和不同的靶基因。已有研究證實反義Snail轉錄因子能引起肝癌細胞體外侵襲、運動潛能下降，推測Snail居于信號通路級