X射線上調非小細胞肺癌Axin表達并促進高表達Axin的細胞凋亡.pdf

1、中國醫(yī)科大學博士學位論文X射線上調非小細胞肺癌Axin表達并促進高表達Axin的細胞凋亡姓名：韓陽申請學位級別：博士專業(yè)：病理學與病理生理學指導教師：王恩華20090301材料與方法一、患者收集1998年2月至2002年5月在中國醫(yī)科大學附屬第一醫(yī)院手術切除的95例原發(fā)性非小細胞肺癌組織和20例正常肺組織蠟塊。患者生存時間的計算為從手術日期開始到由于復發(fā)／轉移而死亡的日期或隨訪截止日期為止，其中男性72例，女性23例，中位年齡58歲(3

2、3歲76歲)。根據(jù)IntemationalUnionAgainstCancer(2002)TNM分期標準，I期40例，II期18例，Ⅲ期35例，Ⅳ期2例；鱗癌45例，腺癌40例，其它病理類型10例；高分化29例，中分化24例，低分化42例。這些患者術前均未接受放療及化療。二、免疫組織化學染色及TUNEL法采用SP法對非小細胞肺癌組織及正常肺組織進行免疫組織化學染色，檢測非小細胞肺癌組織及正常肺組織中Axin、p53表達情況。采用TUNE

3、L(TerminaldeoxynucleotidyltransferasedUTPnickendlabeling)檢測非小細胞肺癌組織及正常肺組織中細胞凋亡情況。所有切片由兩位有經(jīng)驗的病理研究者在不知道臨床參數(shù)的情況下獨立閱片并計數(shù)細胞。每張切片在400倍顯微鏡下計數(shù)5個不同視野中100個細胞中的陽性細胞數(shù)并計算Axin、p53的平均陽性細胞率及凋亡指數(shù)(ApoptosisIndexAI)。參考Xu等標準：Axin陽性細胞率40％為陰性

4、，≥40％為陽性。參考Rusch等標準：p53陽性細胞率5％為陰性，≥5％為陽性。三、X線照射肺癌組織將手術切除的新鮮的非小細胞肺癌組織迅速切成4mmx4mmxlmm大小的組織塊，迅速放入37℃DMEM無菌培養(yǎng)基中，經(jīng)電子直線加速器產(chǎn)生的6MeVX射線(劑量率為2Gy／min，劑量為]Gy，源瘤距為100cm，照射野涵蓋全部癌組織)照射，然后在37。C5％C02培養(yǎng)箱內(nèi)繼續(xù)培養(yǎng)5小時后取出，PBS洗滌。一部分組織用于提取蛋白和總RNA，