HDL上調(diào)破骨細(xì)胞ABCG1表達(dá)從而影響破骨細(xì)胞生成并促進(jìn)其凋亡.pdf

1、目的：膽固醇是細(xì)胞膜的主要組成部分，在破骨細(xì)胞的形成及生存中發(fā)揮重要作用。破骨細(xì)胞本身幾乎不合成膽固醇，因此細(xì)胞內(nèi)膽固醇容易失衡而影響破骨細(xì)胞形成或生存。研究發(fā)現(xiàn)HDL水平升高可促進(jìn)破骨細(xì)胞膽固醇流出并促進(jìn)其凋亡，但其促進(jìn)膽固醇流出的機(jī)制及對(duì)破骨細(xì)胞形成的影響尚不清楚。本研究選取RAW264.7單核/巨噬細(xì)胞作為破骨前體細(xì)胞，以RANKL及M-CSF誘導(dǎo)其形成的破骨細(xì)胞為研究對(duì)象，探討HDL促進(jìn)破骨細(xì)胞膽固醇流出的機(jī)制及對(duì)其形成和生存的

2、影響。
　　方法：用含HDL的培養(yǎng)基培養(yǎng)RAW264.7細(xì)胞，加入RANKL及M-CSF刺激其分化形成破骨細(xì)胞，在不同的時(shí)間觀察TRAP陽(yáng)性的多核細(xì)胞的數(shù)目、大小和核固縮情況；用含不同濃度的HDL的培養(yǎng)基培養(yǎng)RAW264.7細(xì)胞，加入RANKL及M-CSF刺激其分化形成破骨細(xì)胞，液體閃爍計(jì)數(shù)儀檢測(cè)其膽固醇流出情況；用含HDL的培養(yǎng)基培養(yǎng)RAW264.7細(xì)胞不同時(shí)間，加入RANKL及M-CSF刺激其分化形成破骨細(xì)胞，液體閃爍計(jì)數(shù)儀檢

3、測(cè)其膽固醇流出情況。HDL3、HDL2、AopA1處理破骨細(xì)胞，觀察其膽固醇流出情況及TRAP陽(yáng)性的多核細(xì)胞的數(shù)目、大小和核固縮情況。用含HDL的培養(yǎng)基培養(yǎng)RAW264.7細(xì)胞3天， 加入RANKL及M-CSF刺激其分化形成破骨細(xì)胞，熒光定量PCR檢測(cè)破骨細(xì)胞ABCG1、SR-B1mRNA的表達(dá)，Western blot檢測(cè)ABCG1、SR-B1、Cav1蛋白表達(dá)。siRNA沉默ABCG1表達(dá)，觀察其膽固醇流出情況及TRAP+

4、的多核細(xì)胞的數(shù)目。
　　結(jié)果：1）HDL處理細(xì)胞后，形成的破骨細(xì)胞最大直徑減小，融合指數(shù)減小，核固縮的破骨細(xì)胞增多；2）HDL促進(jìn)破骨細(xì)胞膽固醇流出，且呈濃度及時(shí)間依賴性，細(xì)胞內(nèi)游離膽固醇明顯減少;3）不同的HDL亞型促進(jìn)破骨細(xì)胞膽固醇流出的能力不同，以HDL3能力最強(qiáng);4）HDL處理使破骨細(xì)胞表達(dá)ABCG1增多而SR-B1減少;5）ABCG1 siRNA處理使HDL促進(jìn)破骨細(xì)胞膽固醇流出的能力下降，破骨細(xì)胞形成恢復(fù)，凋亡減少;6