MiR-216b靶向抑制ABCG1表達(dá)對(duì)破骨細(xì)胞分化、融合及生存的影響.pdf

1、目的：探討miR-216b是否能通過靶向作用于ABCG13'UTR并抑制其表達(dá)，觀察過表達(dá)或沉默 miR-216b后對(duì)破骨細(xì)胞分化、融合、生存的影響及相關(guān)機(jī)制。
　　方法：應(yīng)用生物學(xué)信息分析網(wǎng)（microRNA.org）及在線軟件尋找與ABCG1能靶向結(jié)合的 MicroRNAs，分析與預(yù)測(cè)各物種間 miR-216b的保守性、靶基因、ABCG13'UTR序列及miR-216b ABCG1結(jié)合自由能、結(jié)合位點(diǎn)等基本信息。不同濃度（0、

2、10、20、40、80nm） miR-216b mimics或miR-216b inhibitor及不同時(shí)間（0、12、24、48h）處理細(xì)胞，通過 TRAP染色檢測(cè)破骨細(xì)胞生成情況，計(jì)算TRAP陽性成熟破骨細(xì)胞數(shù)目、直徑及融合核數(shù)目；實(shí)時(shí)定量 PCR檢測(cè)ABCG1 mRAN表達(dá)水平，Western blot檢測(cè)ABCG1蛋白質(zhì)表達(dá)水平。miR-216b mimics、miR-216binhibitor或miR-216binhibito

3、r+ABCG1 siRNA轉(zhuǎn)染細(xì)胞48h后，通過TRAP染色檢測(cè)破骨細(xì)胞生成情況，計(jì)算 TRAP陽性成熟破骨細(xì)胞數(shù)目、直徑及融合核數(shù)目；實(shí)時(shí)定量PCR檢測(cè)ABCG1 mRAN表達(dá)水平，Western blot檢測(cè)ABCG1蛋白質(zhì)表達(dá)水平，液體閃爍計(jì)數(shù)儀檢測(cè)其膽固醇流出情況。
　　結(jié)果：生物學(xué)信息分析網(wǎng)及在線軟件分析結(jié)果顯示 miR-216b在多物種間具有高度保守性，多個(gè)靶標(biāo)預(yù)測(cè)網(wǎng)站發(fā)現(xiàn) miR-216b能與ABCG13'UTR發(fā)生

4、靶向結(jié)合并調(diào)控其靶標(biāo)基因的表達(dá)。miR-216b能抑制 ABCG1蛋白及 mRNA的表達(dá)，且對(duì) ABCG1蛋白表達(dá)的調(diào)節(jié)具有時(shí)間與濃度依賴性，進(jìn)而增加破骨細(xì)胞數(shù)目、直徑、融合核數(shù)目，促進(jìn) RAW264.7巨噬細(xì)胞向破骨細(xì)胞分化、融合及其生存。miR-216b inhibitor能上調(diào) ABCG1蛋白及 mRNA的表達(dá)，且對(duì)ABCG1蛋白表達(dá)的調(diào)節(jié)具有時(shí)間與濃度依賴性，進(jìn)而減少破骨細(xì)胞數(shù)目、直徑、融合核數(shù)目，抑制 RAW264.7巨噬細(xì)胞