葡萄糖對大鼠骨髓破骨細(xì)胞分化及活性的影響.pdf

1、本文論述了葡萄糖對大鼠骨髓破骨細(xì)胞分化及活性的影響，全文分為兩部分： 第一部分：大鼠骨髓破骨細(xì)胞樣細(xì)胞的體外培養(yǎng)。 研究目的：建立體外破骨細(xì)胞樣細(xì)胞(osteoclast-like cell，OLC)培養(yǎng)體系并對所培養(yǎng)的OLC進(jìn)行鑒定。 研究方法：用M-CSF、RANKL協(xié)同作用于4～6周齡的大鼠骨髓單個核細(xì)胞誘導(dǎo)OLC分化，通過倒置相差顯微鏡、光鏡、掃描電鏡從細(xì)胞形態(tài)學(xué)方面對所培養(yǎng)的OLC進(jìn)行鑒定。 研

2、究結(jié)果：倒置相差顯微鏡以及光鏡下可見典型的不規(guī)則形的多核OLC，TRAP染色陽性O(shè)LC；電鏡下牙本質(zhì)片上貼附的OLC大小及形態(tài)各異，細(xì)胞下方可見骨吸收陷窩，從而證實所培養(yǎng)的細(xì)胞即為具有骨吸收活性的OLC。 研究結(jié)論：采用RANKL和M-CSF協(xié)同誘導(dǎo)大鼠骨髓單個核細(xì)胞分化為OLC，該培養(yǎng)方法穩(wěn)定，有效，具有可重復(fù)性，是一種簡便有效的體外破骨細(xì)胞培養(yǎng)方法。 第二部分：葡萄糖對大鼠骨髓破骨細(xì)胞分化及活性的影響。 研究

3、目的：觀察葡萄糖對培養(yǎng)的大鼠骨髓OLC分化及活性的影響，探討葡萄糖與破骨細(xì)胞之間的關(guān)系。 研究方法：用M-CSF、RANKL協(xié)同誘導(dǎo)大鼠骨髓單個核細(xì)胞向OLC分化，同時加入不同濃度的葡萄糖(0、5.5、15、25mmol/L)干預(yù)，通過觀察抗酒石酸酸性磷酸酶(TRAP)染色陽性O(shè)LC數(shù)、TRAP活性測定及半定量RT-PCR檢測OLC分化過程中RANK mRNA表達(dá)來分析葡萄糖對OLC分化的影響；通過觀察牙本質(zhì)片骨吸收陷窩數(shù)量和面

4、積比以及流式細(xì)胞儀(FCM)檢測OLC膜表面整合素ανβ3(CD61)表達(dá)量來分析葡萄糖對OLC活性的影響。 研究結(jié)果： 1．對破骨細(xì)胞分化的影響：各組細(xì)胞爬片于培養(yǎng)7天時取出行TRAP染色，結(jié)果顯示葡萄糖呈濃度依賴性上調(diào)了TRAP染色陽性O(shè)LC數(shù)，其中高糖(25mmol/L)組與對照(0mmol/L)組比較OC數(shù)量明顯增多(P<0.01)；與對照組比較，高糖組培養(yǎng)3天時TRAP染色陽性O(shè)C數(shù)就開始明顯增多(P<0.01

5、)，表明高糖對OC的促進(jìn)作用始于誘導(dǎo)分化早期；高糖組培養(yǎng)7天時TRAP活性測定高于對照組、葡萄糖5.5mmol/L，組(P<0.01)，而其它兩組與對照組比較無統(tǒng)計學(xué)意義，表明葡萄糖促進(jìn)OC分化且此作用與濃度相關(guān)；RT-PCR半定量分析結(jié)果顯示，葡萄糖呈濃度依賴性上調(diào)OC膜表面RANK mRNA的表達(dá)，其中高糖組培養(yǎng)的各時間點與其它3組比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.01，P<0.05)。 2．對破骨細(xì)胞活性的影響：高糖組培養(yǎng)7天

6、時牙本質(zhì)片骨吸收陷窩數(shù)量和面積比均明顯增多，與其它3組比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.01，P<0.05)；細(xì)胞培養(yǎng)3天時高糖組CD61表達(dá)量及平均熒光強(qiáng)度均明顯上調(diào)，與其它3組比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.01，P<0.05)，表明高糖在OLC分化早期促進(jìn)其聚集融合；高糖組CD61表達(dá)量在培養(yǎng)的5、7天時仍持續(xù)增高，與對照組比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)，結(jié)合牙本質(zhì)片骨吸收陷窩分析高糖可增強(qiáng)破骨細(xì)胞的骨吸收活性。 研究結(jié)論