連翹酯苷A抑制破骨細胞分化的機制探討及其治療應用.pdf

1、目的:破骨細胞與成骨細胞分化的平衡對于維持著機體骨骼正常生理功能。破骨細胞的紊亂是骨質疏松癥和炎性骨溶解的病因之一。探索這些疾病背后的機制，尋求控制破骨細胞分化的新靶點具有重要的意義。
　　方法:為了探究FT-A在炎性骨溶解以及破骨細胞分化中的作用，我們首先構建了LPS誘導的小鼠顱骨骨溶解模型，運用microCT以及組織學分析進行驗證。隨后通過體外破骨細胞分化，主要通過熒光定量PCR、Western blot、染色以及質粒轉染等手

2、段來探究FT-A對破骨細胞分化的作用及內在機制。最后構建了OVX誘導的小鼠骨質疏松模型來驗證FT-A的保護作用。
　　結果:我們首先發(fā)現(xiàn)連翹酯苷A(FT-A)通過抑制破骨細胞的形成或募集來抑制LPS誘導的小鼠顱蓋骨細胞溶解。在體外實驗中，我們發(fā)現(xiàn)FT-A抑制破骨細胞分化和骨吸收，并在體外下調破骨細胞標記基因的表達，包括C-FOS和NFATC1。FT-A主要通過抑制TRAF6的Lys63多聚泛素化，IκBcc的降解和P65的入核來抑

3、制RANKL誘導的NF-κB信號通路的傳導，進而抑制了破骨細胞的分化。隨后我們在BMMs中轉染入持續(xù)激活的P65質粒，發(fā)現(xiàn)可以部分挽救FT-A介導的破骨細胞抑制。進一步探究中，F(xiàn)T-A同時誘導了NICD的降解，增加了RBPJK的表達量，使得RBPJK作為轉錄抑制因子抑制NFATc1的表達。我們運用RNAi將RBPJK的蛋白沉默掉之后，通過TRAP染色，可以發(fā)現(xiàn)破骨細胞分化的水平顯著增加。此外，我們構建了卵巢切除誘導的小鼠骨質疏松模型，也