OPG對破骨細(xì)胞分化的影響及其Rho信號轉(zhuǎn)導(dǎo)機(jī)制.pdf

1、為探討骨保護(hù)素(osteoprotegerin，OPG)對體外培養(yǎng)破骨細(xì)胞(osteoclast，OC)分化的影響以及Rho信號轉(zhuǎn)導(dǎo)機(jī)制，本文采用25 ng/mL M-CSF和30 ng/mL RANKL體外聯(lián)合誘導(dǎo)RAW264.7細(xì)胞分化為OC。在培養(yǎng)過程中添加不同濃度的OPG(0、20、40、80 ng/mL)，作用24h，利用TRAP染色觀察OC分化過程中的形態(tài)學(xué)變化、骨吸收陷窩檢測細(xì)胞的骨吸收活性、免疫熒光檢測F-actin環(huán)的

2、形成，掃描電鏡觀察偽足的變化，實(shí)時(shí)熒光定量PCR(real time quantitative polymerase chain reaction，QRT-PCR)檢測TRAP、Cathepsin K、Cdc42V1、Cdc42V2、Rac1、Rac2、Rac3基因的變化，以及免疫印跡(westernblot)檢測TRAP、Cathepsin K、PAK1、PAK2、PAK3、LIMK、cofilin相關(guān)信號蛋白的表達(dá)。
　　結(jié)果

3、表明:①用25 ng/mL M-CSF及30 ng/mL RANKL聯(lián)合誘導(dǎo)RAW264.7細(xì)胞形成OC過程中，與OC分化和骨吸收相關(guān)的TRAP、Cathepsin K基因及蛋白的表達(dá)均顯著或極顯著上升(P＜0.05或P＜0.01);②OC分化的第3d，加入OPG處理24 h后，能極顯著減少OC的數(shù)目及骨吸收陷窩面積(P＜0.01)，并且極顯著降低與OC分化和骨吸收相關(guān)的TRAP、Cathepsin K蛋白的表達(dá)(P＜0.01);③OP

4、G可以抑制OC的F-actin環(huán)的形成，OPG處理組細(xì)胞偽足小體(pseudopodia corpuscle)的聚合能力降低，排布散亂，肌動(dòng)蛋白環(huán)（filamentous-actin rings，F(xiàn)-actin rings）、絲狀偽足(filopodia)和板狀偽足(lamellipodia)數(shù)量減少;④OPG可顯著或極顯著降低OC分化過程中Rho家族的Cdc42V1、Cdc42V2、Rac2、Rac3基因的表達(dá)(P＜0.05或P＜0.

5、01)，并且顯著或極顯著降低Rho通路相關(guān)蛋白PAK1的Ser144和Thr423位點(diǎn)、PAK2的Ser141和Thr402位點(diǎn)、LIMK1的Thr508位點(diǎn)、LIMK2的Thr505位點(diǎn)的磷酸化水平（P＜0.05或P＜0.01），顯著或極顯著增加cofilin的磷酸化水平(P＜0.05或P＜0.01)，且隨OPG濃度的升高抑制或增加的作用更加明顯。
　　結(jié)論:OPG能夠抑制OC的分化，降低OC的骨吸收活性，并且Rho信號通路參與