三氯化鋁致成骨細胞凋亡的Fas-線粒體信號轉(zhuǎn)導機制.pdf

1、本實驗以體外培養(yǎng)的SD乳鼠顱骨成骨細胞(OB)第3代為實驗對象，依據(jù)三氯化鋁(AlCl3)對OB的半數(shù)抑制濃度(IC50)，設立4個實驗組，即空白對照組(CG)、低劑量染鋁組(LG，1/20IC50)、中劑量染鋁組(MG，1/10 IC50)、高劑量染鋁組(HG，1/5 IC50);向各組培養(yǎng)液中加入三氯化鋁(AlCl3·6H2O)溶液，其終濃度分別為0 mg/mL、0.06 mg/mL、0.12 mg/mL、0.24 mg/mL，培養(yǎng)

2、24h。應用AO/EB雙重熒光染色法檢測OB凋亡形態(tài)，并統(tǒng)計凋亡率; qRT-PCR法檢測OBFas、FasL、FADD、Caspase-8、Caspase-9和Caspase-3 mRNA表達;Western blot檢測OB Fas、FasL、FADD、CytC、Bid和tBid蛋白表達;Caspase活性檢測試劑盒檢測OB Caspase-8、Caspase-9和Caspase-3活性。旨在探討三氯化鋁致OB凋亡的Fas-線粒體信

3、號轉(zhuǎn)導機制。實驗結(jié)果表明:
　　(1)染鋁組OB均可見細胞核呈現(xiàn)點狀亮綠色的早期凋亡細胞，細胞核染為亮橘紅色的晚期凋亡細胞，與細胞核為紅色的壞死細胞;隨染鋁劑量的增加，OB凋亡數(shù)目增多，染鋁組OB凋亡率顯著高于CG(P＜0.01)，表明AlCl3可誘導OB凋亡。
　　(2)染鋁組OB Fas、FasL、FADD mRNA及蛋白表達量，Caspase-8 mRNA表達量及Caspase-8活性均顯著高于CG(P＜0.05;P＜

4、0.01)，說明Fas/FasL信號通路參與了AlCl3誘導的OB凋亡。
　　(3)染鋁組OB胞漿中CytC蛋白表達量、Caspase-9 mRNA表達量及Caspase-9活性均顯著高于CG(P＜0.01)，說明線粒體信號通路參與了AlCl3誘導的OB凋亡。
　　(4)染鋁組OB Bid mRNA及蛋白表達水平、tBid的蛋白表達水平、Caspase-3 mRNA表達量及活性均極顯著高于CG(P＜0.01)，說明AlCl3