糖基化對(duì)糖尿病合并冠狀動(dòng)脈粥樣硬化性心臟病患者高密度脂蛋白膽固醇功能影響的研究.pdf

1、高密度脂蛋白(HDL)是促進(jìn)膽固醇逆向轉(zhuǎn)運(yùn)、抗動(dòng)脈粥樣硬化病變中具有重要的作用的脂蛋白。除血漿水平外，HDL的組成和結(jié)構(gòu)對(duì)其抗動(dòng)脈粥樣硬化作用也有重要意義，經(jīng)物理或化學(xué)修飾后的HDL功能發(fā)生顯著變化，甚至可產(chǎn)生具有致動(dòng)脈粥樣硬化作用的功能異常HDL。2型糖尿病患者常伴脂蛋白代謝異常，動(dòng)脈粥樣硬化發(fā)生率高。糖尿病患者血漿中的蛋白質(zhì)在高糖環(huán)境下可發(fā)生非酶促糖基化修飾，但目前對(duì)糖基化修飾與糖尿病患者HDL功能改變之間的確切關(guān)系尚存在較大意見(jiàn)分

2、歧。了解糖尿病患者HDL的糖基化修飾水平及其對(duì)HDL結(jié)構(gòu)功能的影響，將有助于進(jìn)一步了解糖尿病患者動(dòng)脈粥樣硬化性疾病的發(fā)病機(jī)制，為采取針對(duì)性的預(yù)防與診治提供理論依據(jù)。本研究獲取了糖尿病患者HDI及體外糖基化修飾的健康人HDL組分，比較了不同程度糖基化HDL的抗LDL氧化能力及誘導(dǎo)膽固醇外流功能；旨在明確糖基化修飾與糖尿病HDL抗氧化能力及誘導(dǎo)膽固醇外流功能改變間的關(guān)系，并同時(shí)考查藥物等因素對(duì)其的影響。 目的： 建立檢測(cè)HD

3、L糖基化水平的適宜方法，探索糖尿病合并冠狀動(dòng)脈粥樣硬化性心臟病患者HDL的糖基化水平，明確糖基化修飾與糖尿病患者HDL誘導(dǎo)膽固醇外流功能及抗低密度脂蛋白(LDL)氧化保護(hù)功能改變之間的關(guān)系，探索糖尿病冠心病患者細(xì)胞內(nèi)膽固醇積聚的機(jī)制，并考察使用他汀類藥物對(duì)糖基化修飾及HDL功能的影響。 方法： 1.收集冠心病合并糖尿病患者、單純冠心病患者血漿樣本共19例，健康受試者血漿樣本11例； 2.通過(guò)密度梯度離心方法分離高

4、密度脂蛋白； 3.健康受試者HDL在體外用不同濃度葡萄糖孵育液進(jìn)行體外糖基化修飾； 4.分別通過(guò)果糖胺法和三硝基苯磺酸(TNBS)法檢測(cè)患者HDL的糖基化水平和體外修飾的HDL糖基化水平，并評(píng)價(jià)兩種方法；以糖基化結(jié)果中位數(shù)分為高糖基化水平與低糖基化水平組進(jìn)行后續(xù)功能相關(guān)性研究； 5.用放射性同位素方法檢測(cè)HDL在體外誘導(dǎo)人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞(HUEVC)和HepG2細(xì)胞內(nèi)膽固醇外流的外流率，分析外流率與HDL糖基化水

5、平的相關(guān)性； 6.將各組HDL與健康受試者低密度脂蛋白(LDL)共同孵育，加入Cu2+氧化LDL，通過(guò)檢測(cè)紫外吸收OD234nm測(cè)定脂質(zhì)氧化程度，評(píng)估HDL抗氧化能力評(píng)估，分析HDL的抗氧化能力與HDL糖基化水平的相關(guān)性； 7.分析使用他汀類藥物對(duì)糖尿病患者HDL膽固醇外流功能和抗LDL氧化功能的影響。 結(jié)果： 1.本研究中獲得的HDL濃度及糖基化水平未達(dá)到果糖胺法檢測(cè)靈敏度范圍； 2.經(jīng)TNBS

6、法檢測(cè)，糖尿病患者HDL，的糖基化水平高于非糖尿病患者(1.0172對(duì)0.8067，p=0.017)，但HDL的糖基化水平與HbA1c(p=0.364)及空腹血糖值(p=0.388)不相關(guān)； 3.經(jīng)體外糖基化修飾的HDL誘導(dǎo)HUEVC和HepG2細(xì)胞內(nèi)膽固醇外流的外流率與糖基化水平均不相關(guān)； 4.糖尿病及冠心病患者中，HDL高水平糖基化組與低水平糖基化組的膽固醇外流率間無(wú)顯著性差異(11.38％對(duì)12.09％，p=0.3

7、13)： 5.未經(jīng)他汀類藥物治療的糖尿病患者HDL抗LDL氧化的遲滯時(shí)間(Tlag)顯著低于非糖尿病患者(95.03min對(duì)102.55min，p=0.020)； 6.在全部患者中，HDL的糖基化水平與其抗lDl氧化的Tlag呈負(fù)相關(guān)性(Pearson相關(guān)系數(shù)-0.504，p=0.028)，HDl高水平糖基化患者的Tlag也顯著低于低糖基化水平組(90.37min對(duì)102.46min，p=0.022)； 7.與各

8、組HDl共同孵育的LDl氧化時(shí)吸光度最大值(ODmax)間無(wú)顯著性差異；8.他汀類藥物不影響糖尿病患者HDL的糖基化水平(0.9823對(duì)1.0730，p=0.395)，但可顯著提高患者HDL誘導(dǎo)HUEVC內(nèi)膽固醇流出的外流率(12.23％對(duì)10.28％，p=0.024)，并延長(zhǎng)HDI。抗LDL氧化的Tlag(100.68min對(duì)95.03min，p=0.020)。 結(jié)論： 1)TNBS法可有效檢測(cè)超速離心法獲得的人HDL

9、的糖基化水平。果糖胺法的靈敏度低，不適用于檢測(cè)超速離心法獲得的HDL樣品的糖基化水平。2)與非糖尿病患者相比，糖尿病患者HDL的糖基化水平顯著升高。糖尿病患者HbA1c值或空腹血糖水平與HDL的糖基化水平不平行。使用他汀類藥物不影響糖尿病患者HDL的糖基化水平。 3)糖尿病患者HDL誘導(dǎo)膽固醇外流功能降低，使用他汀類藥物可顯著改善糖尿病患者HDL的外流功能。但糖基化修飾不是糖尿病患者：HDL外流功能下降的直接原因。 4)糖基化修