TGF-β-,1-介導的MMP-2酶活性調(diào)控機制在FDM鞏膜重塑中的作用.pdf

1、目的:該課題以小雞形覺剝奪性近視眼動物模型為研究對象,探索基質(zhì)金屬蛋白酶-2在小雞FDM鞏膜細胞外基質(zhì)重塑中的重要作用及轉(zhuǎn)化生長因子-β1對其表達與活性的調(diào)控.方法:課題分三部分進行研究.第一部分建立小雞FDM、近視恢復眼動物模型,采用組織病理切片HE染色、明膠酶譜法、逆轉(zhuǎn)錄-聚合酶鏈反應免疫組化等方法研究MD對被剝奪眼后極部鞏膜MMP-2及其組織特異性抑制劑-2表達的影響.第二部分在第一部分基礎(chǔ)上,體外培養(yǎng)正常與MD(14d)小雞眼后

2、極部鞏膜,同時以TGF-β1、腫瘤壞死因子-α(Tumor necrosis factor-α,TNF-α)、纖維連接蛋白(Fibronectin,FN)、轉(zhuǎn)鐵蛋白(Ovotransferrin)、堿性成纖維細胞生長因子(basic fibroblast growth factor,bFGF)進行干預,24h后采用明膠酶譜法檢測MMP-2酶活性水平變化,采用RT-PCR法檢測MMP-2、TIMP-2 mRNA表達的變化以篩選出調(diào)控MMP

3、-2表達的陽性細胞因子.第三部分采用球后注射法給正常與MD雞眼注射尿激酶型纖溶酶原激活劑纖溶酶原激活劑抑制劑-1以促進或抑制TGF-β表達與活化,每日1次,14d后觀察uPA、PAI-1對正常與FDM小雞眼軸與屈光度變化的影響,結(jié)論:(1)后極部鞏膜MMP-2酶活性特異性增高為小雞FDM鞏膜重塑的重要直接因素,而TIMP-2抑制與基因表達轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)參與MMP-2酶活性調(diào)節(jié)過程;(2)TGF-β1能明顯抑制小雞后極部鞏膜MMP-2酶活性,其