成人喉乳頭狀瘤Pin1和CyclinD1的表達(dá)及意義.pdf

1、目的: 喉乳頭狀瘤是一種喉部良性腫瘤。成人型喉乳頭狀瘤單發(fā)多見、多次復(fù)發(fā)后易惡變，屬喉癌前疾病之一，其惡變率較高。受病理取材部位、病理醫(yī)師經(jīng)驗(yàn)差異影響，對(duì)其惡變的早期診斷不理想。惡性腫瘤的形成是一個(gè)多因素、多步驟作用的細(xì)胞異常增生的過程。蛋白質(zhì)序列中絲氨酸/蘇氨酸-脯氨酸鍵的磷酸化是控制細(xì)胞周期循環(huán)、調(diào)節(jié)細(xì)胞增殖和轉(zhuǎn)化的關(guān)鍵信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)機(jī)制之一。Pin1是多肽基脯氨酰順反同分異構(gòu)酶家族成員之一，主要調(diào)節(jié)有絲分裂相關(guān)蛋白酶，對(duì)細(xì)胞周期

2、運(yùn)行起著非常重要的調(diào)節(jié)作用。 Pin1專一性識(shí)別并順/反異構(gòu)已磷酸化的絲氨酸/蘇氨酸-脯氨酸蛋白質(zhì)，這種順反構(gòu)型轉(zhuǎn)變直接影響蛋白質(zhì)功能活性。CyclinD1是Ras信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路上的關(guān)鍵分子，Pin1過表達(dá)可以使CyclinD1在細(xì)胞核內(nèi)異常蓄積，導(dǎo)致細(xì)胞異常增殖。研究發(fā)現(xiàn)，在多種人類惡性腫瘤中Pin1和CyclinD1過表達(dá)，可見其在腫瘤的形成過程中發(fā)揮了重要作用．研究成人喉乳頭狀瘤及其惡變組織中Pin1和CyclinD1的表達(dá)

3、對(duì)了解成人喉乳頭狀瘤惡變的發(fā)生和發(fā)展具有重要意義。為此，本研究檢測(cè)了成人喉乳頭狀瘤中Pin1和CyclinD1的表達(dá)情況，分析了二者之間的相關(guān)性，探討二者在喉乳頭狀瘤惡變中的作用，為喉乳頭狀瘤惡變?cè)缙谠\斷提供依據(jù)。 方法: 1、實(shí)驗(yàn)材料 收集中國醫(yī)科大學(xué)盛京醫(yī)院耳鼻喉科自1989年4月至2007年3月間手術(shù)和活檢的成人喉乳頭狀瘤病例39例，喉乳頭狀瘤伴中、重度不典型增生(伴不典型增生組)27例，喉乳頭狀瘤伴癌變(

4、惡變組)16例標(biāo)本，共計(jì)82例，作為實(shí)驗(yàn)組。收集喉癌患者喉全切除術(shù)癌旁2cm正常組織10例作為對(duì)照組。 2、染色方法 正常喉組織標(biāo)本經(jīng)4％福爾馬林固定，常規(guī)脫水后石蠟包埋。所有蠟塊連續(xù)切片，每張切片4微米厚，一張HE染色核實(shí)診斷。采用免疫組織化學(xué)方法(S-P)染色，具體步驟按說明書。以PBS代替一抗的切片為陰性對(duì)照。 3、結(jié)果判斷 Pin1判斷的參考標(biāo)準(zhǔn)：Pin1在正常組織不表達(dá)或弱表達(dá)于胞核，過度表達(dá)時(shí)

5、胞核胞漿均著色。(A)陽性細(xì)胞染色強(qiáng)度分為：無染色為0分；細(xì)胞內(nèi)可見淡黃色顆粒，為1分；見棕黃色為2分；棕褐色或棕紅色為3分。(B)500個(gè)細(xì)胞染色陽性細(xì)胞數(shù)分級(jí)：陽性細(xì)胞率0％為0分；1％-33％為1分；34％-66％為2分；≥67％為3分。AxB≤2分者為陰性，≥3分者為陽性表達(dá)。Cyclin D1的結(jié)果判斷參考何國慶標(biāo)準(zhǔn)：以腫瘤細(xì)胞核出現(xiàn)淡黃色或棕黃色顆粒為陽性細(xì)胞，每片隨機(jī)觀察5個(gè)視野，取均值，陽性細(xì)胞率>10％為陽性。

6、 4、統(tǒng)計(jì)學(xué)分析方法 應(yīng)用SPSS11.0版統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)處理，采用x2檢驗(yàn)、Fisher確切概率法、Spearman秩相關(guān)分析Pinl和Cyclin D1在各組中的表達(dá)關(guān)系及二者的相關(guān)性。P<0.05或P<0.0125為有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。 結(jié)果: 1、Pin1在正常組和病變組中的表達(dá)情況 Pin 1在喉正常鱗狀上皮組織中不顯色或僅有微弱顯色(0/10)；在各病變組中過表達(dá)，染色定位于胞核及胞漿。在12.8

7、2％(5/39)的喉乳頭狀瘤組、40.74％(11/27)的伴不典型增生組和81.25％(13/16)的惡變組中顯示陽性表達(dá)。正常組與病變組的Pin1表達(dá)經(jīng)Fisher確切概率檢驗(yàn)具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；經(jīng)多樣本率x2檢驗(yàn)三組中Pin1蛋白表達(dá)陽性率不全相等，經(jīng)x2分割法檢驗(yàn)各組之間差異有顯著性。 2、Cyclin D1在正常組和病變組中的表達(dá)情況 Cyclin D1在喉正常鱗狀上皮組織中不表達(dá)(0/10)；在各病變組中過表達(dá)，

8、染色定位于胞核和胞漿。其中17.95％(7/39)的喉乳頭狀瘤組、33.33％(9/27)的伴不典型增生組及75％(12/16)的惡變組呈陽性表達(dá)。正常組與病變組的Cyclin D1表達(dá)經(jīng)Fisher確切概率檢驗(yàn)具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；經(jīng)多樣本率x2檢驗(yàn)喉乳頭狀瘤組、伴中重度不典型增生組、惡變組織中Cyclin D1蛋白表達(dá)陽性率不相等；經(jīng)x2分割法檢驗(yàn)喉乳頭狀瘤組與伴不典型增生組之間表達(dá)無顯著性差異，其余各組之間差異有顯著性。 3、P

9、in1和Cyclin D1表達(dá)的相關(guān)性 在Cyclin D1陽性表達(dá)的7例喉乳頭狀瘤組織中，有4例Pin1陽性表達(dá)。經(jīng)spearman秩相關(guān)檢驗(yàn)兩者在喉乳頭狀瘤組的表達(dá)呈顯著正相關(guān)。將伴不典型增生組和惡變組合并。在Pin1陽性表達(dá)的24例兩組中有17例Cyclin D1陽性表達(dá)。 結(jié)論: 1、Pin1署CyclinD1在成人喉乳頭狀瘤、喉乳頭狀瘤伴中重不典型增生、喉乳頭狀瘤惡變組織中表達(dá)逐漸增強(qiáng)，可能在喉乳頭狀瘤